preparazione campione

Question 1

potere di risoluzione definizione e da cosa dipende?

Answer 1

minimo grado di distanza possibile tra due punti distinguibili, dipende dalla lunghezza d’onda della luce e dall’indice di rifrazione del mezzo

Question 2

contrasto da cosa dipende?

Answer 2

dalla differenza di assorbimento della luce delle varie strutture cellulari o tissutali

Question 3

come si calcola il limite di risoluzione del microscopio?

Answer 3

Con la formula di ABBE R= lambda/ n sen alfa
n= indice di rifrazione del mezzo di solito aria
alfa= angolo max di raccolta della luce

Question 4

potere risoluzione max del microscopio ottico?

Answer 4

0,25 micrometri

Question 5

tecniche di microscopia ottica (6)

Answer 5

microscopio ottico:
- a contrasto di fase
- a interferenza
- in campo scuro
- a luce polarizzata
- a fluorescenza
- confocale

Question 6

microscopio ottico a contrasto di fase

Answer 6

sfrutta le differenze negli indici di rifrazione e trasformandole in differenze di intensità (si ha aumento di contrasto non risoluzione)

Question 7

m.o. a interferenza

Answer 7

sfrutta due differenti lunghezze d’onda che incontrandosi creano un’interferenza e restituisce immagini 3D (a rilievo)

Question 8

m.o. in campo scuro

Answer 8

il condensatore che illumina il campione è posto obliquamente e restituisce immagini chiare in campo scuro

Question 9

m.o. luce polarizzata

Answer 9

sfruttan luce polarizzata che una volta che ha attraversato le strutture evidenzia l’organizzazione delle proteine fibrose del preparato

Question 10

m.o. a fluorescenza

Answer 10

sfrutta la luce ultravioletta per ottenere l’immagine, è usato per sostanze che emettono luce visibile

Question 11

m.o. confocale

Answer 11

sfrutta la luce laser permette di fare scansioni del preparato che possono essere sovrapposte e dare un immagine 3D

Question 12

potere di risoluzione max microscopio elettronico?

Answer 12

0,4 nanometri

Question 13

tipi di m.e.?

Answer 13

• a trasmissione (TEM)
• a scansione (SEM)

Question 14

come funzione il m.e.?

Answer 14

Fascio di elettroni emessi da un catodo e accellerati nel vuoto attraversa il preparato al posto delle lenti ci sono campi elettrostatici e magnetici

Question 15

TEM

Answer 15

immagini a grande risoluzione, gli elettroni attraversano le strutture biologiche come nel m.o.

Question 16

SEM

Answer 16

meno risoluzione, però permette di ottenere immagini 3D perchè scansiona il preparato senza trapassarlo

Question 17

Fasi preparazione campione (4)

Answer 17

fissazione
inclusione
sezionamento
colorazione

Question 18

Fissazione

Answer 18

• serve a conservare il campione
• si usa alcol etilico alcol metilico formaldeide e glutaraldeide
• oppure congelamento rapido (deve essere fatto in fretta se no si formano cristalli che danneggiano la struttura

Question 19

Inclusione

Answer 19

-serve a dare uno spessore sufficiente al campione per essere sezionato
- si toglie l’acqua grazie ad alcol etilico e xilolo
- si include la paraffina (cera) dà spessore
- nel caso di congelamento questo si salta

Question 20

Sezionamento

Answer 20

-si taglia il campione con:
- microtomo con tecnica standard
- criostato con congelamento rapido
-ultramicrotomo se il preparato è destinato al TEM

Question 21

Colorazione

Answer 21

• si tratta il preparato con xilolo e alcol etilico per togliere lo strato di paraffina perchè idrofoba e lo si reidrata
• poi lo si colora con coloranti basici o acidi

Question 22

Coloranti basici

Answer 22

EMATOSSILINA (blu)
-colora molecole acide come il DNA

Question 23

Coloranti acidi

Answer 23

EOSINA (rosa-rosso)
- colora molecole basiche come le proteine

Question 24

colori lipidi

Answer 24

coloranti liposolubili
BLU NILO, SUDAN III

Question 25

colori carboidrati

Answer 25

-reazione acido periodico - Schiff (LEUCOFUCSINA che è fucsia) - metodo al carminio di Best per il glicogeno

Question 26

colori proteine

Answer 26

- reazione di Millon

Question 27

colori enzimi

Answer 27

reazioni per i prodotti degli enzimi

Question 28

colori acidi nucleici

Answer 28

-coloranti basici come il BLU DI METILENE - miscela verde di METILE-PIRONINA

Question 29

come colora la metile pironina il dna e l'rna?

Answer 29

DNA=VERDE RNA= ROSSO

Question 30

immunoistochimica

Answer 30

si usa per strutture proteiche simili tra loro si usano anticorpi che si legano ad antigeni specifici e si visualizzano grazie a fluorocromi molecole che si legano agli anticorpi senza danneggiarli e visibili quando colpiti da luce dello spettro visibile

Question 31

citometria a flusso

Answer 31

- si usa il citometro a flusso che usa un fascio laser che attraversa la cellula e definisce i parametri morfologici - quelli più complessi possono fare anche il sorting

Question 32

sorting

Answer 32

separazione fisica di cellule postive a un certo antigene da quelle negative

Question 33

coltura in vitro

Answer 33

serve a mantener in vita cellule o frammenti di tessuti al di fuori dell'organismo di origine grazie a un incubazione in mezzi nutritizi adeguati e condizioni ottimali di ph e temperatura e schermati da possibili contaminazioni batteriche

Question 34

FRET

Answer 34

determina se la distanza tra 2 molecole è inferiore alla soglia di possibilità di comunicazione tra 2 cellule cioè di 10 nm

Question 35

CRIOFRATTURA

Answer 35

tecnica di studio che permette di suddividere il doppio strato lipidico della membrana: si procede con rapido congelamento e poi forte colpo grazie a lama di diamanti