Thérapie génique

Question 1

Quels types de cellules conserne la thérapie génique?

Answer 1

Cellules somatiques ou germinales

Question 2

De quelle manière peut se faire le transfert de gène?

Answer 2

In vivo ou ex vivo

Question 3

Pour quels traitements est utilisé la thérapie génique actuellement?

Answer 3

Pour corriger les immuodéficiences et autres maladies génétiques

Question 4

Quels sont les principaux vecteurs utilisé pour le transfert de gènes?

Answer 4

Virus

Question 5

Quel type de maladies sont souvent traités par la thérapie génique?

Answer 5

Maladies héréditaires monogéniques récessives

Question 6

Quels sont les sites les plus aisés d’accès pour la thérapie génique?

Answer 6

Sang, foie, yeux

Question 7

Quels classe de maladies sont les plus souvent traité par thérapie génique?

Answer 7

• Oncologique
• Ophtalmologique

Question 8

Quelles sont les caractéristiques des virus?

Answer 8

• Tropisme
• Gènes viraux
• Pathogénicité
• Immunogénicité
• Persistance

Question 9

Quelles sont les caractéristiques des virus qui sont conservé?

Answer 9

• tropisme (ou modifié)
• Persistance

Question 10

Pourquoi les rétrovirus sont intéressant en thérapie génique quant à leur persistance?

Answer 10

Ils sont une grande persistance car ils intègrent leur génome dans la cellule sans être forcément pathogènique

Question 11

QU’est-ce qui arrive le plus souvent avec les gènes viraux d’un virus?

Answer 11

Ils sont remplacé par le transgène sauf quand on utilise le virus pour tuer cellules ou causer une réaction immunitaire

Question 12

COmment est modifié la pathogénicité d’un virus?

Answer 12

Éliminé dans la majorité des cas car on veux que la cellule survive

Question 13

Comment est modifié l’immunogénicité?

Answer 13

On la diminue le plus possible pour ne pas avoir de réaction immunitaire contre le vecteur

Question 14

COmment est modifié le tropisme cellulaire?

Answer 14

On le modifie en fonction de quelles types de cellules on a besoin qui soient infectées

Question 15

Quelles séquences sont conservé dans les vecteurs viraux par rapport au virus de base?

Answer 15

Les séquences cis pour l’encapsidation, la réplication et l’expression génique

Question 16

Quel type de promoteur peuvenet être utilisé dans le vecteur et quels en sont les avantages?

Answer 16

Promoteur naturel du gène : permet de faire exprimer le gène intégré seulement s’il y a présence de signaux d’activation -) régule niveau d’expression
Promoteur du virus : présent dans le virus de base

Question 17

Quel type de vecteur permet une expression du transgène à long terme?

Answer 17

Les rétrovirus

Question 18

Dans quelle forme se retrouve le génome du rétrouvirus dans la cellule transfectée?

Answer 18

Intégré au génome

Question 19

Dans quelle forme se retrouve le génome du lentivirus dans la cellule transfectée?

Answer 19

Épisomal : libre

Question 20

Dans quelle forme se retrouve le génome du AAV dans la cellule transfectée?

Answer 20

Épisomal : libre

Question 21

Pourquoi est-il plus difficile de produire un vecteur viral à partir des lentivirus et des adénovirus?

Answer 21

Parce qu’on a souvent tous été exposé sans le savoir donc on produit une réponse immunitaire plus forte

Question 22

Comment fabriquer un vecteur à partir d’un adénovirus?

Answer 22

• Suppression de gènes viraux : E1 (réplication), parfois E3+E4
• Insertion du gène d’intérêt à l’aide dun plasmide shuttle
• Recombinaison du plasmide avec le gènome
• Production du vecteur en grande quantité dans d’autres cellules qui produisent des particules virales sans réplication

Question 23

QU’est-ce que le pseudotypage?

Answer 23

Remplacemet des protéines de surface d’un virus par celles d’un autre virus pour modifier le tropisme

Question 24

QUe contiennent les 3 plasmides lors du système de 3 plasmide?

Answer 24

Plasmide 1 : produit les protéines virales pour l’assemblage du virus
Plasmide 2 : contient le transgène avec un psy et les LTR pur l’encapsidation et la transcription
Plasmide 3 : produit la protéine d’enveloppe pur le tropisme

Question 25

Comment fonctionne le système 3 plasmides?

Answer 25

- Co-transfection des 3 plasmide dans une cellule de production - La cellule exprime les protéines virales et l'enveloppe - Elle transcrit l'ARN viral qui contient le transgène - Formation des particules avec seulement l'ARN du transgène

Question 26

Comment peut-on diminuer les risques biologiques associés aux vecteurs viraux?

Answer 26

En faisant une délétion du LTR 5' et LTR 3' : plus de promoteur viral, donc pas de réplication En retirant les gènes accessoires

Question 27

Comment l'insertion d'un rétrovirus au gènome peut affecter celui-ci?

Answer 27

- Augmenter l'activation d'un gène - Faciliter l'activation d'un gène par fusion de promoteur - Insertion qui inactive - Modification du profil d'épissage

Question 28

Pour quel site le vecteur MLV montre-t-il une préférence d'insertion?

Answer 28

Les sites d'initiation de la transcription

Question 29

Pour quel site les vecteurs lentivirus montrent-ils une préférence d'insertion?

Answer 29

pour les séquences transcrites

Question 30

Quelles sont les caractéristique des adeno-associated virus?

Answer 30

Virus avec présence de protéine de structure et d'enzyme mais qui ne sont pas capable de se propager par eux même (parasita des adénovirus)

Question 31

Comment entre et se réplique les AAV dans une cellule?

Answer 31

- Entrent par endocytose suite à fixation sur récepteurs spécifiques - Nécessite infection simultanée par un autre virus (adénovirus) - En présence : expression de protéine de réplication et amplification d'ADN - Sans présence : reste stable dans la cellule sous forme épisomal et peut parfois s'intégrer

Question 32

Dans la construction d'un vecteur AAV, qqu'est-ce qui est conservé?

Answer 32

Seulement les ITR car ils sont essentiels

Question 33

Que fournissent les 3 plasmide utilisé pour la formation de AAV?

Answer 33

Plasmide 1 : produit les particule virale (pas ITR) Plasmide 2 : fournit le génome (avec ITR) Plasmide 3 : plasmide adénoviral (nécessaire pour la réplication et l'intégration)

Question 34

À l'aide de quel type de vecteur sont indrotuit les récepteurs chimériques de CAR T cells?

Answer 34

De vecteurs rétroviraux ou lentiviraux

Question 35

Comment à été corrigé la maladie monogénique de la peau?

Answer 35

- Prélèvement des cellles de la peau - Modification ex vivo avec un vecteur viral pour insérer la version corrigé du gène - Expansion cellulaire en culture pour former couche de peau - Greffe sur patient

Question 36

Comment est réalisé la thérapie génique de la b-thalassémie

Answer 36

- Prélèvement de cellules souches hématopoïétique - Midification ex vivo par utilisation de vecteur lentiviral dérivé du VIH-1 pour introduire une copie fonctionnelle du gène b-globine - Greffe autologue

Question 37

De quoi est composé le vecteur lentivial utilisé pour la b-thalassémie?

Answer 37

- LTR modifiés (LTR3' sans U3) - b-LCR (enhancer) - Promoteur b-globine

Question 38

Quel est la particularité du transgène utilisé pour la b-thalassémie?

Answer 38

Inséré en antisens pour limiter les interférences et faciliter l'encapsidation