Transfection

Question 1

Quel est le but de la transfection ?

Answer 1

etudier un gène, un promoteur, un arn ou une protéine (constituants de la cellule) en permettant la surproduction d’une protéine.

Question 2

Que faut-il faire avant de transférer un gène dans une cellule ?

Answer 2

Le cloner avec un vecteur d’expression.

Question 3

est-il possible de modifier un gène après que le transgène a été inséré ?

Answer 3

Oui !

Question 4

Donner trois métodes pour transférer un vecteur d’expression.

Answer 4

Physique : électroporation
Chimique : cations lipidiques (ex phosphate de calcium)
Biologique : agrobactérium, vecteur viraux.

Question 5

Qu’est-ce que la transduction des cellules ‘

Answer 5

Lorsqu’on utilise des vecteurs viraux (rétrovirus) comme vecteur de transfert

Question 6

Un vecteur d’expression doit comporter deux parties : lesquelles ?

Answer 6

Une permettant la surproduction du plasmide dans les bactéries et une autre permettant l’expression du transgène dans les cellules.

Question 7

Qu’est-ce que doit contenir le plasmide pour pouvoir répliquer dans les bactéries ?

Answer 7

une origine de réplication

Question 8

Comment être sûr de séletionner uniquement des bactéries avec le plasmide ?

Answer 8

On y inclut un gène de résistance à un antibiotique.

Question 9

Pour permettre l’expression du transgène dans les bactéries, il faut 4 composants : lesquels ?

Answer 9

Promoteur
Terminateur
ADN complémentaire
Séquence polyadéniation

Question 10

Quels promoteurs permettent une expression forte du gène ?

Answer 10

Viral et promoteur cellulaire actine.

Question 11

Quels promoteurs permettent une expression spécifique d’un type cellulaire particulier ?

Answer 11

Promoteur albumine.

Question 12

Quel promoteur est dit inductible, c’est à dire qui permet l’expression du gène qu’après que le promoteur soit libéré d’un répresseur ?

Answer 12

Promoteur tet-on/off.

Question 13

Comment décider de quand le répresseur libère le promoteur ?

Answer 13

En utilisant des antibiotiques spécifique, comme la tétracycline.

Question 14

Comment étudier un promoteur ?

Answer 14

Il faut un gène rapporteur induisant l’expression d’une protéine rapportrice, marquée avec une enzyme (luciférase, galactosidase) ou fluorescente) qui quantifiera l’activité du promoteur.

Question 15

Donner les deux types de transfection.

Answer 15

Transitaire : diminue au cours du temps car plasmide mal transmis au cours des divisions.
Stable : transgène mieux incorporé au génome grâce à l’utilisation de rétroviraux, ou de la recombinaison homologue, ou encore sys CRISPR/Cas9.

Question 16

Comment fonctionne l’électroporation ?

Answer 16

Crée pores au niveau des membranes plasmiques et nucléaire par courant électrique. ADN/plasmide rentre par ce pores.

Question 17

Comment fonctionne le phosphate de calcium / liposomes cationiques ?

Answer 17

Change charge de l’acide nucléique de - à + pour permettre endocytose par la membrane chargée -.

Question 18

Comment fonctionne la méthode de transvection par vecteurs rétroviraux ?

Answer 18

On produit un virus avec 3 plasmides, un produisant l’ARN à encapsider (qui a l’expression du gène à surexprimer), l’autre produsant les enzymes nécessaires (réplicase) et la troisième formant les protéines d’enveloppe du virus pour permettre l’interaction avec les cellules. Le virus formé ne contient que l’ARN du gène ciblé, et donc ne peut pas faire d’autres virus. Il peut alors entrer dans une cellule et se servir de ses rétrotranscriptases pour faire exprimer le gène par la bactérie.

Question 19

Quel limite observe-t-on avec ces techniques d’intégration ?

Answer 19

On ne peut pas prévoir ou est-ce que le gène va être intégrer dans le génome de la cellule !