שיטות לזיהוי רצף ומבנה (שיטות א)

Question 1

אלו שיטות ישירות קיימות לזיהוי רצף ח”א בחלבונים?

2

Answer 1

1. דגרדציה על שם אדמן

2. mass spectrometry

Question 2

למה משמשת המולקולה

FDNB?

Answer 2

סימון של הקצה האמיני בחלבון

Question 3

למה משמשת שיטת הדגרדציה על שם אדמן?

Answer 3

זיהוי רצף ח”א בחלבון

Question 4

כיצד עובדת שיטת הדגרדציה על שם אדמן?

5

Answer 4

- הקצה האמיני מסומן ע"י ריאגנט אדמן ב
pH
גבוה
- הריאגנט גורם לערער הקשר הסמוך 
- הורדה ל
pH=2
גורמת להסרה של הח"א יחד עם הריאגנט
- שימוש ב
HPLC
לזיהוי הח"א שנשרה
- חזרה על השלבים

Question 5

מיהו ריאגנט אדמן?

Answer 5

PITC

Question 6

כמה ח”א ניתן לרצף בעזרת שיטת הדגרדציה של אדמן?

Answer 6

30-50

Question 7

מה עושה טריפסין?

Answer 7

פרוטאז החותך בקצה הקרבוקסילי של ארגנין וליזין

Question 8

מה עושה כימוטריפסין?

Answer 8

פרוטאז החותך בקצה הקרבוקסילי של ח”א ארומטיות

Question 9

מה עושה פפסין?

Answer 9

פרוטאז החותך בקצה האמיני של לאוצין וח”א ארומטיות

Question 10

מה עושה

cyanogen bromide?

Answer 10

ריאגנט כימי החותך בקצה הקרבוקסילי של מתיונין

Question 11

למה משמשת שיטת

mass spectrometry?

Answer 11

זיהוי רצף ח”א של חלבונים

Question 12

על מה מבוססת ההפרדה של חלקיקים ב

MS?

Answer 12

על היחסה מסה/מטען שלהם

Question 13

מהם שלושת המרכיבים העיקריים של מכשיר ה

MS?

Answer 13

• מקור יוני
• mass analyzer
• detector

Question 14

מה תפקידו של המקור היוני המצוי את מכשיר ה

MS?

Answer 14

לקחת חלבונים/חלקיקים בודדים ולהפוך אותם לגז טעון חשמלית

Question 15

מה תפקידו של ה
mass analyzer
המצוי במכשיר ה
MS?

Answer 15

משתמש בשדה חשמלי ומגנטי ע”מ להפריד את החלקיקים המואצים בו לפי היחס מסה/מטען

Question 16

MALDI-TOF
זה סוג של 
MS.
מה ייחודי בה?
(3)

Answer 16

• תחילה יש שימוש בפרוטאזות לביקוע הפפטיד
• שימוש בלייזר הופך אותם לפאזה גזית ולטעונים
• המסה נקבעת לפי ה
  TOF (time of flight)
  של החלקיקים דרך המטריקס

Question 17

מה מיוחד ב
tandem MS (MS/MS)?
(2)

Answer 17

• מאפשר קביעת רצף ח”א ע”י הרצה חוזרת של החלקיקים במכשיר לאחר ביקוע שלהם
• מאפשר זיהוי של מודיפיקיציות פוסט-תרגומיות על החלקיקים

Question 18

מה ייחודי ב

LC-MS?

Answer 18

צימוד
HPLC
ל
tandem MS
מאפשר לזהות את ההרכב החלבוני של תערובת חלבונים בפעם אחת

Question 19

למה משמשת שיטת

circular dichorism?

Answer 19

שיטה אופטית לזיהוי מבנים שניוניים בחלבון

Question 20

למה משמשת שיטת

nuclear magnetic resonance (NMR)?

Answer 20

שיטה המשמשת לקביעת המבנה התלת-מימדי של חלבון תוך שימוש בשדה מגנטי

Question 21

על איזה שיטה מבוססת שיטת ה

MRI?

Answer 21

NMR

Question 22

למה משמשת השיטה של
דיפרקציית
X-Ray?

Answer 22

מציאת המבנה התלת-מימדי של מאקרומולקולות המבוססת על שבירת קרני
X
כתוצאה מפגיעתם בקריסטל של המאקרומולקולה הנבחנת