OGMs Flashcards
O que são organismos transgênicos ?
São organismos contendo moléculas de DNA recombinante introduzidas intencionalmente (artificialmente) por intervenção humana em seu genoma
Como os transgênicos são produzidos ?
A partir de técnicas de biologia molecular
Qual o objetivo de produzir transgênicos ?
Associar (unir) sequências de DNA entre diferentes organismos integrando DNA exógeno em plantas, animais e microorganismos. Dessa forma, novas características podem ser inseridas ou, até mesmo, descartadas de um organismo
Com relação a produção de animais transgênicos e noucates, qual o método no qual o DNA endógeno é removido do genoma, e um DNA estranho é introduzido ?
O método I (Knock-out e Knock-in)
Se referindo a produção de animais transgênicos e noucates, no método II (transgênico) o DNA exógeno é adicionado ao genoma.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
O método II (transgênico) de produção de animais transgênicos e noucates, é usado apenas em murino.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. É no método I
O que ocorre no método II (transgênico), quando o assunto é produção de animais transgênicos ?
Ocorre a supreexpressão de um gene construído após a microinjeção de DNA dentro de pronúcleo
Quais são os métodos de construção dos OGMs ?
- Método I - Knock-out e Knock-in (gene dirigido ou mutação dirigida)
- Método II - Transgênico
No método de construção Knock-out e Knock-in o DNA é introduzido primeiro em células embrionárias primordiais (ES).
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
No método Knock-out e Knock-in o que acontece com as células primordiais embrionárias (ES) que sofreram recombinação homologo ?
São identificadas e injetadas em um embrião de camundongos de 4 dias (um blastocisto)
Qual o nome do método de construção onde o DNA é integrado de uma forma randômica, injetando-o no pronucleo de um óvulo fertilizado ?
Transgênico
Qual o método de construção que é possível realizar em muitas espécies animais ?
Método II (transgênico)
Quais as etapas do método I de construção (Knock-out e Knock-in) ?
- O DNA exógeno é introduzido nas células embrionárias primordiais (ES)
- Depois ocorre a seleção de células que expressam o gene desejado
- Ocorre a injeção das células (ES) transformadas na massa interna de células (Blastocisto)
- Ocorre o implante no útero
- É realizado o teste de descendência (F1) para a presença do gene
- Ocorre o cruzamento de descendência de heterozigotos para produzir linhagem de transgênicos homozigotos (na F2)
Quais as etapas do método II de construção (Transgênico) ?
- O DNA (gene desejado, e com vetor) é injetado no pronucleo do óvulo fertilizado
- Ocorre o implante no útero
- É realizado o teste de descendência (F1) para a presença do gene
- Ocorre o cruzamento de descendência de heterozigotos para produzir linhagem de transgênicos homozigotos (na F2)
Qual tecnologia de transgene vai ocorrer apenas supreexpressão ?
O transgênico (Método II)
Qual tecnologia de transgene vai ocorrer supreexpressão, deleção e alteração ?
Knock-out e Knock-in (Método I)
* gene dirigido ou mutação dirigida
O método II ( Transgênico) é uma tecnologia de transgene mais dispencdiciosa, requer mais tempo e material.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. Na verdade é o método I (Knock-out e Knock-in) - gene dirigido ou mutação dirigida
Qual método de tecnologia de transgene permite a produção de diferentes linhas fenotípicas (sítio e número de cópias integradas) ?
O método II (Transgênico)
O método II (Transgênico) é simples, com tempo e fundos requeridos limitados.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
Qual método (tecnologia transgene) permite uma integração controlada e ocorre somente uma cópia ?
Knock-out e Knock-in (gene dirigido ou mutação dirigida)
O método II (Transgênico) ocorre a integração incontrolável e integração randômica (efeitos posicionais).
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
Cite exemplos de camundongo transgênico (Knock-in)
- (Nagy) com GFP (proteína verde fluorescente)
- (BRINSTER) com hormônio de crescimento humano
- Com beta-galactosidase
A sequência gênica estrutural: fluorescência, refere a que tipo de camundongo transgênico ?
(Nagy) com GFP
A sequência gênica estrutural: hormônio de crescimento, refere a que tipo de camundongo transgênico ?
(BRINSTER) com hormônio crescimento de humano
A sequência gênica estrutural: beta-galactosidase, refere a que tipo de camundongo transgênico ?
Beta-galactosidase
Quando ocorre o processo do camundongo transgênico com beta-galactosidase
Ocorre quando o promotor para um gene expressado nos progenitores de neurônios I (neurogenina 1) dirige a expressão de um gene repórter (beta-galactosidase)
As estruturas neurais expressando o transgene repórter são verde-azul escuro
Onde são colhidas as células primordiais embrionárias (ES) ?
Da massa interna de células de blastocistos de camundongo
As células primordiais embrionárias (ES) são crescidas continuamente em cultura (sem sinais de envelhecimento e limite de células descendentes)
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
As células primordiais embrionárias (ES) em cultura permanecem indiferenciadas. Porque isso ocorre ?
Por causa do LIF (fator inibitório de leucemia), do contrário elas se agregariam e se diferenciariam
As células primordiais embrionárias (ES) são totipontetes.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa?
Falsa. Elas são pluripotentes - retém o potencial para produzir todas as células (do animal, somáticas e germinativas)
Quais células podem ser introduzida em um embrião já existente, e ainda ser cultivada, manipuladas e então reijetadas em blastocistos onde elas podem vir a contribuir todas as partes do embrião ?
As células primordiais embrionárias (ES)
O que é Neo e o ele faz ?
Gene de Neomicina. Ele confere resistência ao G418 (análogo da Neomicina)
O que é HSV-TK e o que ele faz ?
Gene da Timidina Cinase de HSV (herpes-vírus simples). Ele confere susceptibilidade ao aciclovir
Quando o aciclovir fosforila ele se torna tóxico e mortal para a célula. Porque ?
Porque ele leva o bloqueio da replicação do DNA
O aciclovir é analogo da Neomicina.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. Ele é análogo da Timidina
O análogo da Neomicina é o G418
A Timidina Cinase (TK) de mamíferos é capaz de fosforilar aciclovir.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. Ela é incapaz. A Timidina Cinase (TK) de HSV (herpes simples) que tem a capacidade de fosforilar o aciclovir
As células de mamíferos transformadas com HSV-TK passam a fosforilar aciclovir e morrem.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
Sobre o direcionamento gênico usando o sistema de seleção positiva-negativa (utilizadas no método I) responda:
A inserção DIRECIONAL de DNA vetor ocorre pelo recombinante com DNA vetor integrado no gene alvo.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa?
Verdadeira
Sobre o direcionamento gênico usando o sistema de seleção positiva-negativa (utilizadas no método I) responda:
Como se chama o processo no qual o recombinante com DNA vetor é integrado aleatóriamente ao genoma
Inserção aleatória de DNA vetor
A inserção ALEATÓRIA ocasiona a vida e a inserção DIRECIONAL ocasiona a morte.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Falsa. É ao contrário. A inserção DIRECIONAL gera vida e inserção ALEATÓRIA gera a morte
Sobre os resultados da alteração da sequência endógena responda:
O que ocorre no método Knock-out ?
Ocorre a deleção da expressão do gene do tipo selvagem. Por substituição da região gênica endógena por fragmentos de DNA não funcional
Sobre os resultados da alteração da sequência endógena responda:
O que ocorre no método Knock-in ?
Ocorre a substituição do gene tipo selvagem pelo gene - X (seja repórter, transgene, trans-espécie, etc). Por substituição da região genica endógena por fragmentos de DNA funcional
Sobre os resultados da alteração da sequência endógena responda:
O método Knock-out a deleção ocorre por fragmentos de DNA não funcional, e o método Knock-in a substituição ocorre por fragmentos de DNA funcional.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
Com relação ao regiões gênicas substituídas no OGM responda:
Qual o objetivo da sequência codificadora ?
Estudar a expressão do gene, na verdade do promotor
Com relação ao regiões gênicas substituídas no OGM responda:
Qual o objetivo do promotor ?
Expressar o gene em determinado local e tempo, para obter o produto ou para estudar o efeito da sua expressão
O que é GFP ?
Proteína verde fluorescente
O que é CAT ?
Cloranfenicol acetil-transferase
O GFP, o CAT e a beta-galactosidase são exemplos de: ?
Genes repórteres
Quais são as etapas para a identificação de camundongos transgênicos nocaute-Southern
- Extração de DNA
- Digestão do DNA com enzimas de restrição
- Análise por Southern
- Conclusão
Com relação a identificação de camundongos transgênicos nocaute-Southern responda:
O que ocorre na etapa de extração de DNA da calda ?
- É adicionado na calda cortada proteínas K tampão
- Depois durante a noite ocorre a incubação (52-55 graus)
- Logo após é feito a transferência do sobrenadante para tudo com isopropanol
- Nessa etapa ocorre a precipitação
- E por fim o DNA é dissolvido em tampão
Quais as etapas para a construção de um camundongo transgênico ?
- Transferência células (ES)
- Identificação Recombinantes homólogos
- Injeção dos blastocistos
- Identificação químeras
- Cruzamento das químeras (BACKCROSS)
- Nascimento descendência
- Cruzamento heterozigotos
- Nascimento descendência
- Identificação homozigotos
Geração de animais-modelo para estudo de doenças humanas (principalmente de herança dominante), como, fibrose cística, doença inflamatória crônica de intestino, Alzheimer, doenças de Prion; é uma aplicação dos organismos transgênicos.
Essa afirmação é verdadeira ou falsa ?
Verdadeira
