Siembra de bacterias y digestión con enzimas Flashcards
Función de las enzimas de restricción
Se unen al ADN en los sitios de restricción y cortan el ADN del gen de interés. También cortan el plásmido donde se insertará el gen
Función de la DNA ligasa
Une al gen de interés en el plásmido
Genes del plásmido pARA
gen de resistencia a la ampicilina (ampR) y el activador de arabinosa (araC).
pBAD
impulsa la expresión del gen al servir como el sitio de anclaje para la ARN-polimerasa—> transcripción
gen araC
inhibe la transcripción al codificar una proteína que se une al promotor pBAD, bloqueando la unión de ARN pol
Cuando el gen rfp se expresa correctamente, las cepas bacterianas se observarán
De color rojo
todas las enzimas de restricción producen fragmentos de ADN con extremos complementarios. V/F
Falso, algunas generan cortes no complementarios, denominados “extremos romos”. La enzima ligasa aún puede unir estos extremos romos, pero con mayor dificultad.
plásmido pKAN-R
contiene el gen rfp, que codifica una proteína fluorescente roja, el promotor de expresión génica pBAD y el gen de resistencia a la kanamicina (kanR)
Genes del plásmido pARA-R
- gen rfp
- ampR
- AraC
- pBAD
es el plásmido que ya fue trasnformado con enzimas de digestión
Para que sirve la electroforesis en gel en la digestión enzimática
Después de realizar una digestión enzimática de un sustrato, es importante verificar si la enzima ha cortado el sustrato en fragmentos más pequeños como se esperaba.
Pasos de la práctica de digestión con enzimas
Pasos de la práctica de siembra de bacterias
Función de la azucar arabinosa
bloquea la acción del gen araC al unirse a este último, lo que obliga al gen a liberar el ADN.
Por eso, cuando esta presente en el medio de cultivo, las cepas se observan rojas ya que se transcribe el gen de interés rfp
