Transformación bacteriana Flashcards
ADN bacteriano
se encuentra de forma no ordenada y no compacta
plásmidos
moléculas autorreplicantes bicatenarias circulares de ADN
Cuando los plásmidos se clonan, volviéndose parte del genoma bacteriano, se denominan
Episomas
Transformación bacteriana
proceso en el que las bacterias recolectan ADN de otros organismos similares que se encuentra dentro del medio en el que crecen
El plásmido insertado en una bacteria debe contener
- Un gen reportero (permite visualizar la transcripción del plásmido al cultivarlo)- (gen de resistencia a ampicilina)
- Gen de interés ( rfp (proteína fluorescente roja))
- Promotores y reguladores
¿Cómo se comprueba que la transcripción ha resultado exitosa?
Selección: cultivando una colonia de las cepas a las que se les insertó el plásmido en un medio que contiene el antibiótico al que el gen produce resistencia
La clonación de ADN es
el proceso de hacer muchas copias de un fragmento de ADN específico, como un gen.
Ligación
los investigadores primero insertan un fragmento de ADN específico, como un gen, en otro fragmento circular de ADN llamado plásmido.
Este paso usa enzimas de restricción y ADN ligasa
1) Bacterias se mezclan con ADN; 2) Se aplica un choque de calor, lo que hace que algunas bacterias recolecten el plásmido debido a que su membrana se vuelve más permeable y porosa
Despues de una ligación:
transferir el ADN a las bacterias en un proceso llamado transformación, donde:
3) El plásmido se integra en el genoma mediante clonación
Pasos generales de la transformación y siembra bacteriana:
- Ligación
- Transformación
- Selección
Todas las colonias, que se encontraban en el medio, presentaran el mismo plásmido. V/F
Falso, Al cortar y pegar ADN, es posible la:
* formación de productos secundarios además del plásmido que se pretende construir
* Cierre del plásmido
* Gen entra en sentido inverso
¿Qué importa si un gen entra al revés en el plásmido?
el gen debe apuntar en la dirección correcta en relación al promotor, o la secuencia control que induce la expresión génica para producir una proteína.
Resumen de los pasos de la transformación bacteriana:
1) Bacterias se mezclan con ADN
2) Se aplica un choque de calor, lo que hace que algunas bacterias recolecten el plásmido debido a que su membrana se vuelve más permeable y porosa;
3) El plásmido se integra en el genoma mediante clonación
4) Las bacterias se colocan en una placa con antibióticos para observar cuáles recolectaron el antibiótico;
5) Las bacterias que fallaron en recolectar el plásmido no proliferan y mueren
Método de laboratorio
