Bakteriologi: Diagnostiske modaliteter

Question 1

Hvordan kan MRSA diagnosticeres?

Answer 1

• PCR
• MALDI-ToF
• Bakteriologisk dyrkning på Brilliance MRSA2 agar plade.

Question 2

Er det vigtigt at lave antibiotikafølsomhedstest på multiresistente bakteriestammer?

Answer 2

Ja!
På trods af at mange antibiotika kan være ineffektive imod bakterier som MRSA, så er der forskel imellem stammer på resistens overfor nogle antibiotika.

Question 3

Hvad er MALDI-ToF?

Answer 3

MALDI-ToF står for Matrix-Assisted Laser Desorption-Ionization Time-of-Flight.
Det er en teknik som tager udgangspunkt i cellekultur af bakterier som blandes med en matrix-substans. Denne matrix opløser cellerne og sætter sig fast på proteiner.
I maskinen får en laser bakterie-matrix blandingen til at fordampe og en mekanisme tæller derefter hvor mange og af hvilken størrelse proteiner med matrixkomponent som flyver forbi. Letteste proteiner først, derefter de største og tungeste.
En graf over dette sammensættes og sammenlignes med en database over kendte bakteriers grafer.
Ideen er, at hver enkel bakteriespecies efterlader en unik graf.

Question 4

Hvad er PCR og qPCR?

Answer 4

Polymerase Chain Reaction og Quantitative (Real Time) Polymerase Chain Reaction er diagnostiske modaliteter som bygger på at identificere genomisk materiale.
Først foretages en opformering af det genomiske materiale som skal analyseres. Dette gøres sammen med udvalgte primers, som er sammensat efter forventet agens (unik primer for hver bakterie).
På standard PCR udføres en gel-elektroforese og der sammenlignes bånd med en negativ og positiv prøve.
Ved kvantitativ real-time PCR analyserer en maskine antallet af opformerede DNA/RNA strenge via en flouriserende markør.

Question 5

Hvilke faktorer spiller ind på om en prøve er god eller dårlig?

Answer 5

• At vide hvornår der skal, og hvornår der ikke behøves, at blive foretaget en prøve.
• At opsamle det korrekte testmateriale.
• At bruge den korrekte teknik til at opsamle testmateriale.
• At opbevare sit testmateriale i et passende medium.
• At prøven bliver opbevaret, afsendt og analyseret på den korrekte måde.

Question 6

Hvor kan man finde oplysninger om hvordan/hvornår prøver tages og behandles korrekt?

Answer 6

• vet.dtu.dk; alle dyr
• vsp.lf.dk; produktionsdyr
• Antibiotikavejledningen til familiedyr; familiedyr

Question 7

Hvordan forandre grænseværdierne for diagnostiseret infektiøs cystitis sig, ved hhv.
- Cystocentese
- Kateterurin hos handyr
- Spontant afsat urin/kateterurin hos hundyr
… for hhv. hund og kat

Answer 7

• Cystocentese hund + kat: > 1.000 CFU/mL
• Kateter, hanhund: > 10.000 CFU/mL
• Kateter, hankat: > 1.000 CFU/mL
• Spontan/kateter tæve: > 100.000 CFU/mL
• Spontan/kateter hunkat: > 10.000 CFU/mL

Question 8

Hvordan foretages bedst prøveudtagning fra hhv. øvre og nedre luftveje?

Answer 8

• Ved prøveudtagning i øvre luftveje er det vigtigt ikke at involvere ydre nares, og gerne med brug af et rhinoskop.
• Ved nedre luftveje er BAL (Broncho-Alveolær Lavage) bedst og TA (Trans-tracheal lavage) et godt alternativ.

Question 9

Hvad er MacConkey agar (MAC) selektiv og indikativ for?

Answer 9

• MAC selekterer primært for Enterobacteceae familien, da disse stort set er de eneste som kan vokse herpå.
  Det inkluderer E. Coli, Salmonella, Klebsiella, Proteus, Yersinia, Enterobacter og Pseudomonas.
• MAC indeholder laktose og laktose-postive bakterier vil give en lilla baggrund og pink kolonier. Laktose-negative bakterier giver gul baggrund og hvide/gennemsigtige kolonier.

Question 10

Hvilke former for hæmolyse af blodagar har Staphylococcus spp.

Answer 10

Alpha: Bred zone med total opklaring og uklar kant.
Beta: Bred, mørk opklaring med uklar kant.
Delta: Snæver, zone med total opklaring og skarp kant.
Beta-delta (gamma): Double-hæmolyse med komplet hæmolyse skarprendet omkring kolonien og bredere ukomplet hæmolyse længere fra kolonien.

Question 11

Hvilke former for hæmolyse af blodagar har Streptococcus spp.?

Answer 11

Alpha: Grønlig zone omkring kolonien.
Beta: Total opklaring med sløret kant.

Question 12

Hvad er standard dyrkningsprocedure ved bakteriologisk undersøgelse af mælkeprøver?

Answer 12

Aerob inkubation på hhv. blodagar med esculinsyre og blodagar med penicillin.
Hvis ingen vækst, så anaerob inkubation i 24 timer.

Question 13

Hvordan kan det bestemmes om en bakterie er gram negativ eller gram positiv?

Answer 13

Gram-farvning eller KOH-test

Question 14

Hvornår er en KOH-test positiv? Og er den så gram positiv eller negativ?

Answer 14

En KOH-test er positiv når der er trådtrækning efter blanding.
Ved positiv test, er bakterien gram-negativ.

Question 15

Prøver fra alle organer udstryges på blodagar og inkuberes aerobt ved 37 grader, men hvornår inkuberes der også anaerobt?

Answer 15

Ved abdominale aspirater, synovialvæske, organer og abscesser/sår.

Question 16

Hvilke metoder bruges til at bestemme en bakteries antibiotikafølsomhed?

Answer 16

• Agar diffusion test
• Microbroth dilution test
• E-test

Question 17

Hvordan udføres en agar diffusions test?

Answer 17

• 0,5 McFarland opløst renkultur spredes på Mueller-Hinton agar med vatpind i jævnt lag
• Passende udvalg af indikative antibiotika discs påsættes pladen
• Inkuberes til næste dag ved 37 grader
• Opklaringszonens diameter rundt om hver discs (Breakpoint) aflæses med lineal og sammenlignes med skema, som herfra afgør om bakterien er følsom, intermediær eller resistent.

Question 18

Hvad betyder Breakpoint-værdien ved antibiotikafølsomhedstest i forhold til organspecifik behandling og dosis af antibiotika?

Hvordan skal henholdsvis ‘følsom’, ‘intermediær’ og ‘resistent’ tolkes?

Answer 18

Antibiotikafølsomhedstest tager udgangspunkt i hvad koncentrationen er i serum. I mange tilfælde vil der være en dårligere koncentration i væv end i serum, men det modsatte kan også være tilfældet.

Følsom, intermediær og resistent betyder at den pågældende bakterie ved normal dosis og koncentration som i serum kan:

• Blive hæmmet (følsom)
• Hæmning er afhængig af sted og dosis (intermediær).
• Resistent ved normal dosis (resistent)

Question 19

Hvem og hvordan fastlægger Breakpoint-værdier?

Answer 19

Primært CLSI (USA) og EUCAST (EU) fastlægger breakpoint-værdier ud fra eksperimenter med forskellige koncentrationer af antibiotika til hæmning af specifikke bakterierstammer (forskellige med forskellig grad af resistens). Breakpoint-værdien fastlæges dog mere eller mindre subjektivt og kan være konservativ eller det modsatte.

Question 20

Hvad er en CAMP-test og hvad bruges den til?

Answer 20

• Bruges til at identificere Gruppe B-streptokokker (Streptokokkus agalactiae) som giver anledning til kronisk mastitis og atrofi er kirtelvævet hos kvæg
• På en blodagar podes en streg (diameteren) med en beta-hæmolytisk Staphylococcus aureus. Vinkelret herpå (uden at røre) podes den mistænkte Gruppe B-streptokok. E
• Efter inkubation i 24 timer vil man, hvis positiv, se en pilespids-formet hæmolyse-zone imellem de to podede stammer.