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GENOMICA > Biología Molecular > Flashcards

Biología Molecular Flashcards

1
Q
  1. fraccionamiento de ácidos nucleicos - 2 tipos
A

electroforesis en gel, ultracentrifugación (sedimentación)

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2
Q

Separación de DNA por electroforesis en gel

A

La separación de moléculas de DNA mayores de 25 kb suele hacerse mediante la técnica de electroforesis en campo con pulsos en la que la dirección del campo eléctrico en el gel se cambia en forma periódica, lo que ocasiona que las moléculas de DNA se reorienten durante la migración.

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3
Q

Todos los fragmentos de DNA que están presentes en un gel pueden revelarse mediante

A

mediante la inmersión del gel en una solución de bromuro de etidio para luego observar el gel con luz ultravioleta.

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4
Q

Separación de ácidos nucleicos por ultracentrifugación

A

Separación de moléculas de DNA de diferente tamaño por la VELOCIDAD de sedimentación

Separación de las moléculas de DNA por sedimentación de EQUILIBRIO con base en las diferencias en la composición.

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5
Q

La sedimentación por velocidad

A

las moléculas de ácido nucleico se separan según la longitud del nucleótido

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6
Q

A mayor coeficiente de sedimentación, (velocidad)

A

más lejos se mueve la molécula en un periodo determinado de centrifugación.

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7
Q

La centrifugación de equilibrio (o isopícnica)

A

las moléculas de ácido nucleico se separan según su densidad de flotación.

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8
Q
  1. Hibridación de ácido nucleico
A

el adn debe ser monocatenario - membrana nitrocelulosa - sondas marcadas

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9
Q

Para llevar a cabo la hibridación…

A

los fragmentos fraccionados de DNA se desnaturalizan y transfieren a una membrana de nitrocelulosa, que se incuba con sondas de DNA (o RNA) con marca radiactiva o fluorescente.

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10
Q

proporciona una medida de la similitud en la secuencia de nucleótidos entre dos muestras de DNA,

A

Hibridación de ácido nucleico

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11
Q

dos moléculas de ácido nucleico de cadena sencilla con secuencia de bases complementaria pueden formar

A

un híbrido de doble cadena.

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12
Q
  1. síntesis química de DNA
A

Si se requiere una molécula de doble cadena, se sintetiza como dos cadenas complementarias que pueden unirse entre sí por hibridación. Las moléculas sintéticas de mayor longitud se elaboran en segmentos que se unen

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13
Q

en la actualidad la
síntesis de oligonucleótidos se realiza mediante

A

mediante máquinas controladas por computadora
conectadas a depósitos de reactivos.

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14
Q
  1. Tecnología de DNA recombinante
A

El DNA recombinante puede usarse en diversas formas.
Para empezar, se considera una de las aplicaciones más
importantes: el aislamiento del genoma de un
segmento particular de DNA que codifica un
polipéptido determinado.

2adn-fuentes diversas

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15
Q

qué son las moléculas de ADN recombinante

A

son moléculas que contienen secuencias de DNA derivadas de más de una fuente.

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16
Q

Ejemplo de clonación de DNA con plásmidos bacterianos.

A

El DNA se extrae de células humanas, se fragmenta con EcoR1 y los fragmentos se insertan en una población de plásmidos bacterianos.Una vez que la célula bacteriana captó un plásmido recombinante del medio, la célula da origen a una colonia de células que contienen la molécula de DNA recombinante.

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17
Q
  1. Amplificación enzimática de DNA por reacción en cadena de la polimerasa
A

✓ Amplificación de DNA para clonación o análisis
✓ Pruebas para la presencia de secuencias de DNA específicas
✓ Comparación de moléculas de DNA
✓ Cuantificación de moldes de DNA o RNA
- faros moleculares

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18
Q

PCR

A

Reacción en Cadena de la Polimerasa

amplifica pequeños segmentos

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19
Q

Cómo se hace la amplificación por PCR

A

adaptar a los moldes de RNA si primero se les convierte en DNA complementarios, con transcriptasa inversa.

resistente al calor

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20
Q

Con cada ciclo de duplicación, las cadenas se separan, los segmentos de flanqueo (cebadores) se

A

unen con los extremos de la región seleccionada y la polimerasa copia el segmento intermedio

21
Q

cómo se muestra que la PCR es positiva?

A

los cebadores PCR se hibridarán con él y la PCR generará un producto

22
Q
  1. Secuenciación
    de DNA
A

✓Sanger-Coulson

✓Secuenciación paralela
masiva (2a generación)

✓Actuales (3a generación)

23
Q

la secuenciación de Sanger-Coulson y PCR se fusionaron en una

A

técnica de secuenciación

24
Q

método de secuenciación cíclica:

A

PCR y Sanger-Coulson
combina los aspectos bioquímicos del primer método con los ciclos repetitivos del segundo

moléculas hijas con marca fluorescente se separan, se lee la intensidad y longitud de onda de la luz fluorescente, por electroferogramas

25
Q

Secuenciación paralela masiva (o secuenciación de la segunda generación)

A
  • no se clona
    -se preparan directamente los fragmentos a partir del genoma en su totalidad y cada uno es amplificado más adelante hasta formar una población abundantísima.
    -síntesis de DNA dependiente de polimerasa,
  • logran la identificación directa de nucleótidos individuales a medida que son incorporados por las polimerasas, en tiempo real.
26
Q

Secuenciación de DNA Actuales (3a generación)

A
  1. La identificación de nucleótidos se basa en las diferencias de propiedades iónicas de los cuatro nucleótidos que se detectan, conforme cada uno pasa, uno tras otro a través del nanoporo - muy rápido -
  2. secuenciación por síntesis, –fluorescencia, incubación, corridas.
27
Q
  1. Genotecas de DNA
A

Colecciones de fragmentos de DNA clonado

  1. Genotecas genómicas (fago lambda , YAC
    y BAC)
  2. Genotecas de cDNA (transcriptasa inversa)
28
Q

genotecas genómicas

A

1.2 enzimas (HaeIII y Sau3A) de restricción , reconocen secuencias muy cortas y susceptibles, para dividirla, se digiere, se fracciona, se incorpora ne las partículas de fago

29
Q

para qué sirven las pariculas de fago

A

para generar el millón de placas necesarias para asegurar la representación de cada segmento individual de un genoma de mamífero.

30
Q

YAC- genotecas genómicas

A

cromosoma artificial de levadura

acepta segmentos ADN x 1 millón de pares de bases

31
Q

BAC- genotecas genómicas

A

cromosoma artificial bacteriano

acepta segmentos ADN 500 bases, factor F, + velocidad

32
Q

Genotecas de cDNA

A

se aísla una población de RNA mensajeros y se utiliza como plantilla para que la transcriptasa inversa forme una población de híbridos DNA-RNA

33
Q

la clonación de cDNA sirve para

A

análisis de la expresión genética y el corte y empalme alterno.

34
Q
  1. Transferencia de DNA a células eucariotas y embriones de mamífero
A

Se incorpora el DNA en el genoma de un virus que no está en replicación y permitir que el virus infecte una célula

35
Q

La transferencia de genes mediada por virus se conoce como

A

transducción

36
Q

retrovirus modificados

A

contienen un genoma de RNA que se transcribe a la inversa en DNA dentro de la célula.

37
Q

células se incuban con DNA en ampolletas especiales que contienen electrodos que aplican un pulso eléctrico breve

A

electroporación

38
Q

las células se tratan con DNA que se une con lípidos de carga positiva (liposomas catiónicos) capaces de fusionarse con la bicapa lipídica de la membrana celular y llevar el DNA al citoplasma

A

lipofección

39
Q

Microinyección directa de
DNA en el núcleo celular.

A

forma + directa de introducir genes ajenos a una célula

núcleos de los oocitos y huevos

40
Q

Una forma de introducir genes ajenos consiste en incorporarlos en el plásmido Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens

A

induce la formación de agallas-masas tumorales-

se aisla de bacterias, para producir plásmido recombinante, transforma células vegetales

41
Q

Las células vegetales pueden servir como blancos para pelotillas microscópicas de tungsteno cubiertas con DNA que se disparan…

A

con una pistola de genes

para introducir genes ajenos en las células de las plantas monocotiledóneas

42
Q

pistola de genes técnica que se emplea para-

A

para modificar el material genético de varios tipos distintos de células vegetales.

43
Q
  1. Edición y silenciamiento génico
A
  • avanzada
    -inversa
44
Q

Genética de avanzada-

A

aprendizaje de los
genotipos mediante el estudio del fenotipo mutante

(g-f)

45
Q

Genética inversa-

A

proceso para determinar el fenotipo (o sea la función)
con base en el conocimiento del genotipo

(f-g)

46
Q

Mutagénesis in vitro

A

permite a los investigadores hacer cambios específicos muy pequeños en una secuencia de DNA

47
Q
  1. RNA de interferencia
A

proceso en el que se degrada un mRNA específico por la presencia de un pequeño siRNA bicatenario cuya
secuencia está contenida dentro de la secuencia de mRNA

48
Q
  1. Uso de anticuerpos
A

proteínas que se producen en los tejidos linfoides como respuesta a la presencia de materiales extraños, o antígenos.

GENOMICA (14 decks)

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