Bioteknologia Flashcards
(35 cards)
Miksi DNA:n eristys kylmässä?
Hidastaa nukleaaseja ja muita entsyymejä
Millä proteiinit denaturoidaan DNA:n eristyksessä
Fenolilla tai kloroformilla
Millä DNA saostetaan eristyksessä
Kalsiumkloridilla ja kylmällä etanolilla, DNA saostuu, koska sen kasliumsuola ei liukoinen
Miten mRNA eristetään
mRNA:n poly-A häntä saadaan tarttumaan tymiinipitoisiin nukleiinihappoihin suodattimessa
Mitä tapahtuu agaroosielektroforeesissa
Kaivoihin pipetoidut DNA pätkät kulkevat sähkövirran mukana kohti plusnapaa (DNA:n nettovaraus negatiivinen)
DNA-konsentraation mittauksessa käytetty aallonpituus
260 nm
Miksi dideoksiriboosi sekvensoinnissa
Puuttuva hydroksyyliryhmä estää juosteen synteesin jatkumisen
Kuinka monta aluketta sekvensoinnissa`
Yksi
Hybridisaatio
Tietty DNA tai RNA voidaan tunnistaa kun sen annetaan muodostaa emäspareja leimatun koettimen avulla.
DNA-sirun toiminta
Sisältää leimaamattomia koettimia, leimattu DNA hybridisoituu ja voidaan tunnistaa
PCR-reaktioseoksen koostumus
Monistettava DNA, alukkeet, DNA-polymeraasi, nukleotidiseos, puskuriliuos
Kuinka monta aluketta PCR:ssä
Kaksi eri juosteissa. Alussa ja lopussa
PCR syklin osat
denaturaatio, alukkeiden kiinnittyminen, pidennys
RT-PCR:n toiminta
Nukleiinihapoissa kiinni väriaineella leimattuja koettimia. DNA-polymeraasi rikkoo koettimen synteesin aikana ja väriaine vapautuu
Restriktioentsyymin toiminta
Katkaisee DNA:n tietyn emäsjärjestyksen kohdalta
Kohesiivinen DNA:n pää
Tahmea eli juosteet eri pituiset päistä
Ligaasin toiminta
Liittää DNA:n päät yhteen
Käänteiskopioijan toiminta
Valmistaa RNA:sta yksijuosteista DNAA eli cDNAa
Mistä käänteiskopioijaentsyymi
Retrovirukset
Terminaalitransferaasin toiminta
Lisää DNA:n 3’-päähän nukleotidejä ilman mallijuostetta. Voidaan esim liittää radioaktiivisia nukleotideja tai valmistaa sitoutumiskohta alukkeelle
CRISPR toiminta
Opas-RNA tunnistaa tarkan kohdan genomia ja Cas9-nukleaasi leikkaa DNA:n
Mitä CRISPR-geeniajurissa
CAS9, ohjaus-RNA ja haluttu siirtogeeni
Geeninsiirto bakteeriin
Transformointi tai elektroporaatio
Geeninsiirto eläinsoluun
Elektroporaatio, mikroinjektio, liposomit, transduktio virusvektorilla