Chapitre 4 : Etudes fonctionnelles Flashcards
(30 cards)
Quel est le but des études fonctionnelles par radioactivité ?
De suivre des synthèses de molécules biologiques mais aussi de localiser ces biomolécules dans les cellules
Qu’est-ce qu’un précurseur radioactif ?
Précurseur de molécules biologiques qui ont incorporé des radio-isotopes
Donner un exemple précis de précurseur radioactif
Le Tritium : il peut se substituer à l’hydrogène dans les précurseurs de molécules biologiques
Quel est le précurseur radioactif des protéines ?
La Leucine Tritiée
Quel est le précurseur de l’ARN ?
L’Uridine Tritiée
Quel est le précurseur radioactif de l’ADN ?
La Thymidine Tritiée
Quelles sont les 2 techniques de radioactivité ?
L’Autoradiographie
L’expérience du pulse-chase
Quel est le principe de l’autoradiographie ?
Incorporer un précurseur radioactif dans les cellules, émulsion photographique > chambre noire
Comment se réalise l’expérience du pulse-chase ?
Période de pulse courte, cellules incubées en présence de précurseurs radioactifs = synthèse de molécules biologiques radioactives
Période de chase : on élimine les précurseurs : observer le transport des molécules bio radioactives
Quel est le principe des études fonctionnelles après manipulation génétique ?
Modifier l’expression d’un gène ou bien la structure d’une protéine
Que nécessite la manipulation génétique ?
L’introduction de macromolécules dans la cellule = transfection
Donner des exemples de molécules à transfecter
Protéines normales couplées à un fluorochrome
Les ARN interférents
ADN
De quoi est composée la protéine de fusion ?
De protéine à étudier + étiquette
Donner un exemple connu d’une protéine fluorescente
La protéine GFP contient 228 AA, extraite d’une méduse
Quelles sont les 4 méthodes de transfection ?
Méthodes physiques
Fusion membranaire
Endocytose de complexes chimiques
Propulsion de micro projectiles recouverts d’ADN
Quelles sont les méthodes physiques ?
Microinjection
Electroporation
En quoi consiste la micro injection ?
Transférer les macromolécules directement dans une cellules grâce à une micropipette en verre
Quel est l’inconvénient de la micro injection ?
L’injection est individuelle pour chaque cellule
Qu’est-ce que l’électroporation ?
Formation de pores transitoires dans la MP suite à un choc électrique puis réparation spontanée de la MP
En quoi consiste la fusion membranaire ?
Lipofection = utiliser des liposomes, les molécules à transfecter sont introduites dans les liposomes puis fusion des liposomes avec la MP
Qu’est-ce que les liposomes ?
Des vésicules artificielles présentant une bicouche lipidique
Comment s’appelle le principe des liposomes ?
La lipofection
Qu’est-ce que l’endocytose de complexes chimiques ?
On utilise des molécules chargées + comme le DEAE-dextran ou le calcium qui se lient naturellement aux charges négatives des acides nucléiques = formation de complexes
Qu’est-ce que la propulsion ?
On utilise un canon à ADN qui permet d’envoyer à très grande vitesse des billes d’or ou de tungstène recouvertes D’ADN sur les cellules, la très grande vitesse permet de traverser la MP
