Chapitre 8 : Diagnostic bactérien Flashcards
Quel est le but des colorations des bactéries ? /!\
Colorer des bactéries permet d’augmenter la visibilité des micro-organismes au microscope et d’aider dans l’identification, d’accentuer certains traits morphologiques spécifiques (flagelle, capsule, …) et de conserver les lames pour des études ultérieures.
Quelles sont les étapes de la coloration ? /!\
La coloration doit respecter au maximum l’intégrité de la bactérie à observer. Une coloration est constituée de différentes étapes :
- Fixation (chaleur) : fixation des structures externes et internes, inactivation des enzymes, mort de la bactérie
- Coloration : colorant donnant la couleur “positive” à la fin
- Mordançage (facultatif) : intensification de la coloration
- Epreuve (ou décoloration ou différenciation) : caractère que l’on cherche à mettre en évidence
- Contre coloration : permet d’observer les germes décolorés précédemment (colorant donnant un résultat “négatif”)
Comment de passe la coloration de Ziehl-Neelsen ? /!\
Coloration à la fuschine concentrée pendant 5min puis rinçage, puis acide-alcool pendant 30s puis rinçage et pour finir bleu de méthylène pendant 1min puis rinçage.
Permet de mettre en évidence les bactéries dites « alcoolo-acido-résistantes »
Comment se passe la coloration Diff Quick ?
On place la lame 10s dans un fixateur, puis 10s dans un premier colorant et 10s dans un deuxième colorant puis rincer à l’eau
Qu’est-ce qu’un milieu de culture ? /!\
C’est une préparation solide, semi-solide ou liquide comportant tous les nutriments nécessaires. L’agar est le solidifiant le plus souvent utilisé.
Permet la pousse, le transport et le stockage de bactéries.
Quels sont les différents types de milieu de culture ? /!\
- Milieux synthétiques = milieux définis➔on sait ce que l’on cherche
Milieu de culture élaboré à partir d’une formulation de substances chimiques pures. Sa composition chimique qualitative et quantitative exacte est connue. - Milieux naturels = milieux empiriques = milieux complexes➔on ne sait pas ce que l’on cherche
Un milieu naturel est un milieu qui contient un ou plusieurs composés naturels dans sa composition (peptones, extrait de levure, lait, liqueur de maïs, pomme de terre, sang …). Le composé naturel introduit est sujet à des variations naturelles dans sa composition quantitative et (parfois) qualitative. - Milieux ordinaires :
Permettent la pousse de nombreuses bactéries non exigeantes - Milieux enrichis :
Permettent la pousse de bactéries exigeantes - Milieux sélectifs :
Permettent de sélectionner l’espèce ou le genre bactérien recherché - Milieux différentiels ou chromogènes :
Permettent de différencier plusieurs espèces/genres bactériens (sur base des caractéristiques biologiques)
Qu’est-ce que la gélose Columbia au sang ? /!\
Il s’agit d’une gélose enrichie non sélective : elle permet la croissance de presque toutes les bactéries, sauf les plus exigeantes.
Elle permet de lire le caractère “hémolytique” de la souche :
Si l’enzyme digère complètement l’Hb, on parle de souche ß, si l’Hb est transformée en metHb, on parle de souche alpha, si rien ne se passe on parle de souche gamma
A quoi sert la gélose ordinaire ? /!\
C’est une gélose non sélective non enrichie. Elle permet de tester l’exigence de la souche et permet une lecture optimale des pigments bactériens et leur étude
A quoi sert la gélose Mac Conkey ? /!\
Il s’agit d’une gélose non enrichie sélective des bacilles Gram - non exigeantes. Il permet la lecture du caractère lactose.
Son activité sélective est due à la présence de biles et de sels biliaires.
Le rouge neutre (indicateur pH) permet de différencier les germes LACTOSE + (rose) des germes LACTOSE - (incolore/jaunâtre)
Qu’est ce qu’une gélose Edwards ?
Il s’agit d’une gélose sélective pour un isolement rapide des Streptococcus. L’esculine différencie les Streptococcus esculine - (colonies blanches-bleutées) des streptocoques esculine + (colonies brunes-noires)
A quoi sert la gélose Chapman ?
La gélose Mannitol Salt Agar (gélose mannitol-sel) est utilisée pour l’isolement sélectif des staphylocoques et la détection des Staphylococcus aureus à partir d’échantillons cliniques.
La fermentation du mannitol, signalée par un changement de l’indicateur au rouge de phénol, permet de différencier les espèces de staphylocoques
A quoi servent les tests biochimiques ?
Permettent une identification de l’espèce bactérienne recherchée. Ils nécessitent toujours un isolement et une culture de la bactérie.
= ensemble de tests d’assimilation, de transformation et de fermentation
A quoi sert le test oxydase ? /!\
C’est la recherche du cytochrome C oxydase en fin de chaîne de transport des électrons dans la chaîne respiratoire grâce à un réactif synthétique chromogène.
Reactif(réduit) incolore + O2 —— cyt. C oxydase → Reactif(oxydé) coloré + H2O
Une réaction positive donnera un changement de couleur
A quoi sert le test catalase ? /!\
On recherche la présence ou non d’une enzyme, la catalase (une peroxydase trés puissante),
dégradant l’eau oxygénée H2O2 en H2O et O2 suivant la réaction bilan : 2 H2O2 —–catalase → 2H2O + O2
La présence de catalase se traduit par un dégagement gazeux plus ou moins important (bulles)
A quoi sert le test V/F ? /!\
Rapport à l’oxygène de la souche (type respiratoire). Ensemencement d’un milieu dans lequel existe un gradient d’O2
Incubation ➔ germe se développe dans le tube suivant son type respiratoire : aérobie stricte, microaérophile, anaérobie facultatif, anaérobie aérotolérante et anaérobie stricte
