Démarche diagnostique au laboratoire de Bactériologie

Question 1

• Etapes du diagnostic

Answer 1

Pré-analytique: prescription, prélèvements, transport et
conservation
Analytique: technique au laboratoire
Post-analytique: validation et rendu des résultats

Question 2

Diagnostic direct d

Answer 2

Mise en évidence de tout ou une partie de la bactérie
* Macroscopie
* Microscopie
* Culture sur milieux artificiels
* Tests de sensibilité aux antibiotiques
* Détection d’antigènes spécifiques de la bactérie
* Détection d’acides nucléiques spécifiques de la
bactérie

Question 3

Diagnostic indirect d

Answer 3

Sérodiagnostic = Sérologie
Mise en évidence de la réponse immunitaire, dirigée contre
l’infection, par :
. Détection d’Ac spécifiques (le plus souvent sériques)
. Détection d’une réponse d’hypersensibilité (plus rarement

Question 4

diagnostic direct
Analyses effectuées selon des normes:

Answer 4

. Phase pré-analytique :
- prescription et renseignements cliniques
- prélèvement (transport, conservation)
. Phase analytique
. Phase post-analytique :
- expression, interprétation et transmission des résultats

Question 5

Définition d’un produit pathologique
d poly et mono microbien

Answer 5

Produit biologique dans lequel un ou plusieurs micro
organismes ou des antigènes microbiens peuvent être
présents

• PP mono microbiens: cavités stériles, fermées, ne
  communiquant pas avec le milieu extérieur
• PP poly microbiens: cavités ouvertes à l’extérieur

Question 6

Recueil des échantillons d

Answer 6

• Conditions
  Asepsie
  Avant antibiothérapie
  Selon la nature du PP
• Transport et conservation
  Selon le produit pathologique

Question 7

• Aspect du produit pathologique à l’œil nu

Answer 7

oAbondance
oCouleur
oEpaisseur
oOdeur
oPrésence de sang, de glaire
oPrésence d’éléments étrangers…

Question 8

Cytologie quantitative

Answer 8

PP de nature liquide
Nombre d’éléments figurés/ml, μl, mm3
- Cellules de comptage: Malassez, Nageotte, Kova
- Systèmes automatiques de comptage

Question 9

• Cytologie qualitative

Answer 9

oPréciser la nature des éléments figurés
oSur culot de centrifugation
oFrottis coloré au May Grunwald Giemsa MGG
Noyaux en bleu
Cytoplasme en rose

Question 10

Examen bactériologique

• Examen à l’état frais

Answer 10

Entre lame et lamelle: X40
Présence ou non de bactéries
- Abondance (nombre de bactéries/champ microscopique)
- Morphologie
- Mobilité: immobile, péritriche, polaire
- Mode de groupement

Question 11

Examen bactériologique

• Examen après coloration

Answer 11

• Coloration de Gram
  Coloration de référence
  – Colorants: violet de gentiane, lugol, alcool, fuchsine
  Affinité tinctoriale: – bactéries colorées en roses: bactéries à Gram négatif – bactéries colorées en violet: bactéries à Gram positif
  Coloration des cellules: noyau violet, cytoplasme rose

Question 12

Examen bactériologique

• Examen après coloration
• Autres colorations

Answer 12

Bleu de méthylène: aspect intracellulaire des bactéries
Zielh Neelsen: bacilles acido-alcoolo-résistants BAAR …..

Question 13

Examen bactériologique

• Microscopie à fond noir

Answer 13

Observation des bactéries par contraste
Bactéries brillants sur fond noir
Bactéries particulières: spiralées = spirochètes

Question 14

Milieux de culture

Answer 14

• Milieux artificiels contenant les éléments
  nécessaires à la survie et à la multiplication
  des bactéries

Question 15

Tests de sensibilité aux antibiotiques

Answer 15

• Confirmation de l’identification
• Guide du traitement * Techniques: antibiogramme standard

E-test
techniques de dilution
techniques automatisées

Question 16

Biologie moléculaire d

Answer 16

• Détection directe à partir de prélèvements ou Identification
  de bactéries à partir de colonies * Par amplification génique (PCR) : Amplification et détection
  de l’ADN bactérien ou séquençage de gènes cibles
  . Détection de tout agent microbien
  . Détection des agents de méningites communautaires sur
  LCR
  . Détection de M. tuberculosis sur prélèvements
  pulmonaires et autres

Question 17

Diagnostic indirect

• Principe :
  et prelevements

Answer 17

• Principe :
  se base sur les conséquences induites chez l’hôte
  (réaction immunologique), à savoir la production
  d’anticorps
• Prélèvements : - 5 à 10 ml de sang sur tube sec sans anticoagulant
• Recueil du sérum après centrifugation

Question 18

Diagnostic indirect

• Techniques diverses:

Answer 18

• Agglutination
• Hémagglutination
• Immunofluorescence indirecte
• Elisa