DNA repliction Flashcards
(42 cards)
Hvordan blir DNA sekvensen determinert ved replikasjon?
Sekvensen til en strand bestemmer sekvensen til den komplementære stranden.
Hva er de to nøkkel substratene ved DNA-syntese?
- Byggeklosser: dNTPs
- Startpunkt: primer/template junction
Hvordan blir DNA syntetisert?
Utvider 3’-enden av primeren
Hva er den drivende kraften ved DNA syntese?
Hydrolyse av pyrofosfat (2Pi).
Hvor hydrolyse er opptak av vann…
Hvordan blir riktig base inkorporert, og hvorfor er det bare deoxy-nukleotider?
- Kinetisk rettlesning: 10000x raskere ved riktig dNTP vs feil
- Spesifikk geometri og distanse
- Med rNTP blir det feil geometri pga ekstra hydroksyl-gruppe.
Hva er en kilde til feil inkorporering av nukleotider?
- Tautomeric shift: baser kan flippe i «feil» tautomeric form -> feil baseparing.
Hvordan rettleser DNA polymerase?
- Ved exonuclease: fjerner feil base
• Mistmatch DNA endrer geometrien ved det aktive setet -> senere rate.
• Flere basepar av ssDNA beveger seg til exonuclease setet.
• Etter exonuclease beveger 3’-OH enden tilbake til det aktive setet.
Hva er processivity?
- Antall dNTP polymerisert hver gang enzym binder til primer templat.
- DNA pol er et processive enzym
Hva menes med replikasjon gaffelen?
- Begge strandene repliserer samtidig. To polymeriserings reaksjoner nær hverandre. Y-formet junction = replikasjons gaffel.
Hva er primase?
Spesialisert RNA polymerase, lager korte RNA primere, er startpunkt for DNA polymerase.
Hvor går «leading strand»?
- DNA pol «jager» replikasjons gaffelen, går i samme retning.
- Motsatt for «lagging strand».
Hvilke steg er det for replikasjon gaffel åpningen?
- Strand separasjon
2. RNA primase og fjerning av RNA primer.
Hva er oppgaven til DNA helicase?
Unwind heliksen ved hjelp av ATP
Hva er oppgaven til topoisomerase?
Fjerner positiv supercoiling,
Hva er oppgaven til
SSB?
Proteiner som beskytter ssDNA
Hva er MCM komplekset?
- DNA helicase i eukaryote
- Ringformet hexamer
- Human helicase: MCM2-7 kompleks
Hvor mange DNA pol inngår i eukaryot DNA replikasjon?
Samarbeid mellom 3 DNA polymeraser
Hva gjør DNA pol α?
Starter DNA replikasjon etter binding av primase
Hva gjør DNA pol ε?
Syntetiserer leading strand -> mer processive enn DNA pol α.
Hva gjør DNA pol δ?
Syntetiserer lagging strand -> mer processive enn DNA pol α
Hva gjør at DNA pol δ og ε har høyere processvity enn DNA pol α?
- Det kommer av sliding camp.
- Sliding camp er et donutformet kompleks som omringer DNA.
- Reduserer dissosiering av DNA pol
Hvordan festes sliding camp?
Via en clamp loader -> åpner sliding camp ved å bruke ATP -> kan «omsluke» DNA’et.
Hva heter alle proteinene som inngår i replikasjons gaffelen?
Replisome
Hvordan samarbeider DNA pol i replikasjons gaffelen?
- Via et stort proteinkompleks med flere DNA pol.
- E.coli: 3 kopier av DNA pol III + 1 kop av 5-subenhet sliding clamp loader med sliding clamp + 3 koper av τ protein som holder hver sin DNA pol III.