Eksamen 2020 Flashcards
(5 cards)
Adenylyl cyclaser (AC) er en gruppe af membranbundne proteiner, der fungerer som enzymer. De syntetiserer second messenger’en cAMP.
A (25%) Angiv hvilket produkt der dannes ved syntesen af cAMP udover cAMP.
Der dannes pyrofosfat som hydrolyseres videre til fosfat.
AC’erne befinder sig i en lavaktivitetstilstand i fravær af regulatoriske molekyler. Gs proteiner kan som bekendt binde til og aktivere denne type af enzymer. Derudover kan plantestoffet forskolin øge aktiviteten af enzymet ved at binde til et sted på proteinet, der ikke er en del af dets aktive sted (active site).
B (25%) Redegør kort for, hvilken type af reguleringsmekanisme forskolin virker ved på adenylyl cyclaserne.
Forskolin fungere som en positiv allosterisk modulator i det den er i stand til få enzymet til befinde sig i en mere aktiv tilstand, så den ændre dens enzymatiske aktivitet fra T-state til R-state.
Der findes 9 isoformer af de plasmamembranbundne AC’er. Man har hidtil troet, at AC9 ikke kunne aktiveres af forskolin. Det har dog for nyligt vist sig, at forskolin kun kan binde til AC9 og aktivere det, når Gs binder først (Qi et al., 2019. Science 364: 389).
C (25%) Redegør kort for, på molekylært niveau, hvorfor binding af Gs kan gøre, at forskolin kan binde sig til og aktivere AC9.
Når Gas binder inducere det en konformationsændring i AC9, som gør at bindingsitet bliver tilgængeligt for forskolin. Ligesom en unkompetitiv hæmmer ikke kan blindes til det enzymets aktive site før substratet har bundet.
En specialestuderende studerer AC9 i laboratoriet. I et kunstigt, cellefrit system, aktiverer hun AC9 ved at tilsætte Gs i en fast koncentration mens hun måler på dannelsen af cAMP (nmol/min) som en funktion af stigende koncentration af substratet, ATP.
D (25%) Redegør kort for, hvorledes Gs påvirker AC9’s kinetik. Beregninger af Km og Vmax med og uden Gs til stede skal indgå i besvarelsen.
Med andre ord, når Gs binder til AC9, bliver enzymet aktiveret, men der inducereres samtidigt en konformationsændring, der gør, at ATP binder med lavere affinitet (højere Km). Der er med andre ord tale om en kompleks mekanisme, der ikke ligner et klassisk allosterisk enzym.
