exame a fresco

Question 1

O que se observa no exame a fresco?

Answer 1

Observa-se a morfologia, dimensão, modo de associação, mobilidade e a presença ou não de cápsula.

Question 2

Que tipos de coloração existem?

Answer 2

Colorações simples, com o método de Burri que permite observar a cápsula através da tinta da china.
Colorações diferencias onde se inclui o Gram e Ziehl-Neelsen para bactérias álcool-ácido-resistentes.
Colorações específicas para esporos, método de Wirtz-Coklin.

Question 3

O que permite observar a coloração de Gram?

Answer 3

Forma, dimensão, modo de associação, eventualmente esporos, características da parede.
Existe uma diferenciação da parede por reação à coloração, dividindo as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas.

Question 4

Como é que a coloração de Gram permite diferenciar dois tipos de bactérias?

Answer 4

O fundamento da coloração de Gram reside nas diferenças de constituição da parede celular, há uma importância decisiva do teor lipídico.
Nas bactérias Gram-positivas, o peptidoglicano não é solúvel no álcool-acetona e as bactérias conservam o corante roxo.
Nas Gram-negativas, o álcool-acetona remove a camada de lípidos e, com ela, o corante roxo. O segundo corante penetra e ficam com um aspeto rosado.

Question 5

Qual é o protocolo da coloração de Gram?

Answer 5

1. Secar a preparação microscópica.
2. Fixar pelo calor, para promover a aderência das bactérias ao vidro.
3. Arrefecer a lâmina.
4. Coloração básica: corar com o corante primário cristal violeta (ou roxo de genciana), deixar atuar 3 minutos.
5. Escorrer e cobrir a lâmina com o mordente (solução de lugol), 60 segundos; vai se dar a estabilização do corante roxo à parede celular.
6. Lavar com água.
7. Diferenciar com álcool-acetona.
8. Lavar com água.
9. Contrastar com o corante secundário safranina (ou fucsina), 15 segundos.
10. Lavar com água e enxaguar.
11. Observar ao microscópio.

Question 6

Que exceções podem ocorrer com a coloração de Gram?

Answer 6

Culturas antigas de bactérias Gram-positivas podem apresentar alterações na reação ao Gram, aparecendo coradas de vermelho.
Um excesso na quantidade/tempo de atuação do álcool-acetona pode causar o arrastamento de todo o corante roxo e as bactérias Gram-positivas surgem coradas de vermelho (falso-negativo).
Se não usarmos a quantidade suficiente ou se não houver tempo de ação suficiente as Gram-negativas podem corar de roxo (falso-positivo).