Génétique protozoaires

Question 1

Dans quel but faisons-nous un criblage génétique?

Answer 1

Pour trouver un/ des mutant(s) pour un gène impliqué dans un phénotype d’intérêt

Question 2

Pourquoi utilise-t-on D. discoideum comme organisme modèle?

Answer 2

• Organisme simple à manipuler
• Petit génome haploïde (35 Mb)
• Séquence complète disponible
• Grand nombre de gènes avec structure simple
• Manipulation génétique simple (mutagenèse dirigée et aléatoire)
• Peu coûteux
• Permet l’étude de multiples phénomènes biologiques
• Communauté scientifique bien organisée

Question 3

Quelle est la marche à suivre globale du criblage génétique?

Answer 3

1- Connaître les phénotypes possibles de son modèle
2- Bien identifier le phénotype à tester
3- Trouver la méthode la plus simple pour tester le phénotype
d’intérêt
4- Générer une banque de mutants représentative
5- Retester le phénotype
6- Identifier les gènes mutants
7- Retester le phénotype

Question 4

Quels phénotypes peut-on tester chez les protozoaires?

Answer 4

• Développement (absence ou présence de corps fructifères)
• Phagocytose
• Motilité
• Test de virulence

Question 5

Pour quels tests de phénotypes devrait-on utiliser la méthode de la plaque à 96 puits?

Answer 5

• Développement
• Motilité
• Virulence

Question 6

Quelle méthode serait la plus simple pour séparer les cellules selon leur capacité à phagocyter?

Answer 6

Cytométrie en flux avec tri des cellules

Question 7

Quelles sont les étapes de la mutagenèse ciblée?

Answer 7

1- Amplifiication PCR des extrémités 5’ et 3’ du site d’insertion
2- Création du vecteur de mutagenèse avec ces extrémités
3- Électroporation
4- Recombinaison homologue