Kromatografi Flashcards
(22 cards)
Ofte vil man med en kromatografisk metode analysere flere analytter. I disse tilfellene vil vi bruke …
Kvantifisering vil da kreve at vi er innenfor det lineære området til detektoren
Indre standard
Hva er retensjonstid
Elueringstid i væskekromatografi. Tida det tar før en kjemisk forbindelse har kommet gjennom kolonnen.
Hva forteller en topp i et kromatogram?
Det representerer minst en kjemisk forbindelse. Arealet under toppen brukes til å finne mengden av stoffet. Dette kalles integrasjon.
Hva kjennetegner normalfase LC?
Stasjonær fase er polar. Mobilfase er upolar. Analyttene separeres på polaritet. Molekylene med mest polare funksjonelle grupper har sterkest affinitet for stasjonærfasen og har høyest retensjon.
Hva kjennetegner reversfase LC?
Analyttene separeres på polaritet til hele molekylet. Stasjonær fase apolar. Mobilfase polar - ofte vann blandet med metanol eller acetonitrill.
Hva elueres ut først ved revers fase LC?
Polare forb
Både reversfase og normalfase LC separerer på bakgrunn av polaritet. Men hva skiller disse?
Normal fase separerer fof på polariteten til funksjonelle grupper. Reversfase på polaritet til hele molekylet
Hva menes med mobilfasestyrke?
Evnen mobilfase har til å flytte analytten til mobilfasen. Dvs mobilfasens evne til å redusere retensjonstida. Jo høyere mobilfasestyrke, dess lavere retensjonstid. Ulempen med å øke mobilfasestyrken kan være at det blir dårlig separasjon av de første toppene.
Hva er gradienteluering?
Starter LC med lav mobilfasestyrke og øker den gradvis. De siste stoffene med sterk affinitet til stasjonær fase vil bli ellers med en sterk mobilfase.
Ved injisering i LC, hvor mye bør du sprøyte inn i injektoren?
3-5 ganger så mye som loop volumet
Hva er ELSD og RID?
Evaporative light scattering detector og refractive index detector. Universale detektorer. ELSD brukes ofte i HPLC. Mobilfasen fordamper. Lys sendes inn. Analytter som er mindre flyktige enn mobilfasen vil fordampe saktere. Lyset siktes på disse dråpene. Lyset spres. Detektor fanger opp signalet.
En RID måler forskjell på brytningsevne mellom mobilfasen og eluanten som kommer ut av kolonnen.
t = d/v
Forklar
Tid er distanse delt på hastighet. Gjelder med kolonnekromatografi.
d=v*t gjelder ved planar kromatografi (TLC)
Hva menes med retensjonsfaktoren, k?
K = mengde av forbindelser i stadjonærfase/ mengde av forbindelse i mobilfase
k = nS/nM = mS/mM
k =0 vil si at analytten ikke holdes tilbake, den elueres sammen med mobilfasen. K>10: lang retensjonstid. For stekt affinitet til stasjonær fase.
Hva er dødtid?
Dødtid for systemet. Retensjonsfaktoren for stoffet =0. Går ut med mobilfasen. Dødtid er tM. Det er tida mobilfasemolekylene bruker gjennom kolonnen.
Hva er forholdet mellom retensjonsfaktor (k)? Retensjonstid og dødtid (tM)?
k = (tR - tM)/ tM
Hva er justert retensjonstid, t’R?
tR-tM. Retensjonstid minus dødtida for stystemet.
Det er tida forb bruker i stadjonærfasen.
Hva menes med oppløsning i kromatografi?
Grad av separasjon. I et kromatogram er det to faktorer som påvirker oppløsning mellom to topper:
1. avstanden mellom maksnivå på toppene?
2. gjennomsnittlig toppbredde
Hva er toppbredde?
Topper i et kromatogram antas å ha en form som er normalfordelt. Dersom man tegner en triangel, vil linjene krysse basslinja ved 4 stabdardavvik. En toppbredde er derfor definert som 4 standardavvik av en normalfordelingskurve. Dette er vanskelig å måle. Kan måles ved halve høyden, der bredden på toppen er 3,355 standardavvik bred.
Hva er bredde ved baselinje og bredde ved halve høyden i et kromatogram?
Gjelder for et signal. Ved base linja er bredda, WB, 4 standardavvik. Ved halve høyden er Wh 2,355 standardavvik.
Hva er konversjonsfaktoren i toppbredde?
Wh=WB *0,589
Hva forteller uttrykket?
Rs = delta tR / (gjsnittlig WB)
Rs er oppløsningen mellom to topper. Det er differnansen i retensjonstid delt på toppbredde
