Partie 3.3- biotechnologies microbiennes

Question 1

C’est quoi la biotechnologie

Answer 1

processu dans lequel organismes vivants sont manipulés par la biologie moléculaire pour donner produits utiles

Question 2

C’est quoi les enzymes de restriction

Answer 2

enzymes microbiennes qui coupent l’ADNdb (endonucléases)

Question 3

Comment faire la nomenclature des enzymes de restrictions (5 lettres)

Answer 3

1ere lettre=1ere lettre du genre bactérien
2&3eme lettre=lettres de l’espèce bactérienne
4eme lettre=souche bactérienne
5eme lettre=première,deuxième,troisième… enzyme découverte chez cette bactérie

Question 4

4 étapes du fonctionnement des enzymes de restriction

Answer 4

1) enzyme mise en présence de ADNdb
2) enzyme lie à une séquence spécifique de l’ADN
3) enzyme coupe les 2 brins d’ADN à des endroits spécifiques
4) enzyme se libère de l’ADN

Question 5

c’est quoi le principe du clonage (comment ça fonctionne)

Answer 5

fragement d’ADN à cloner est introduit dans un vecteur de clonage, le vecteur va être recombiné et introduit dans un organisme hôte pour la réplication

Question 6

Comment l’ADNc est produit

Answer 6

transcriptase inverse synthétise une molécule d’ADN simple brin à partir de l’ARNm

Question 7

Étapes du clonage (5)

Answer 7

1) séparation de l’ADN à cloner
2) utiliser jusqu’à 2 enzymes de restriction pour créer fragements d’ADN
3) utiliser l’ADN ligase pour construire le vecteur recombinant
4) plasmide recombinant inseré dans cellules hôte par transformation
5) réplication de l’ADN par divison cellulaire de la bactérie

Question 8

C’est quoi la PCR

Answer 8

technique qui permet la synthése de nombreuse copies d’ADN à partir d’un mélange complexe

Question 9

Quelle ADN polymérase themosensible est utilisée pour la PCR

Answer 9

Taq

Question 10

4 Étapes de la réaction PCR

Answer 10

1) dénaturation de l’ADN (95°C)
2) hybridation des amorces complémentaires
3) élongation par l’ADN polymérase (72°C)
4) répétition de ces étapes 30-40 fois

Question 11

4 grands types de vecteurs

Answer 11

1) plasmides
2) vecteurs phagiques (virus)
3) cosmides
4) chromosomes artificiels

Question 12

C’est quoi les plasmides

Answer 12

petites molécules circulaire d’ADN capables de répliquer leur ADN indépendamment. Clonent fragement de plus de 30kb

Question 13

c’est quoi les vecteurs phagiques

Answer 13

génomes de phages modifiés génétiquement et servent à cloner des fragements de tailles définies

Question 14

C’est quoi les cosmides

Answer 14

vecteur hybride de phage et plasmide (entièrement synthétiques) servent à cloner fragements d’au plus 45kb

Question 15

C’est quoi les chromosomes artificiels

Answer 15

vecteurs de clonage spéciaux pour clonage de larges fragements (300-400kb)

Question 16

3 points communs des vecteurs de clonage

Answer 16

1) origine de réplication
2) marqueur de sélection
3) multisite de clonage (MSC)

Question 17

Rôle de l’origine de clonage

Answer 17

permet la réplication du plasmide dans cellule hôte independamment du chromosome bactérien

Question 18

Rôle du marqueur de sélection

Answer 18

permet de différencier les cellules qui ont pris le vecteur (cellules transformées vs non tranformées)

Question 19

Rôle du multisite de clonage

Answer 19

site contenant plusieurs sites de restriction . essentiel à l’insertion de l’ADN étranger

Question 20

2 façons dont l’insertion de l’ADN recombinant peut se faire

Answer 20

1) transformation
2) électroporation

Question 21

c’est quoi l’électroporation

Answer 21

application d’une impulsion électrique qui rend les membranes perméables temporairement et permettent l’absorption de l’ADN étranger

Question 22

2 modifications additionnelles possibles pour le vecteur

Answer 22

ajout de régions régulatrices, ajout de marqueur pour purifier/detecter protéines récombinantes

Question 23

c’est quoi le marquage poly-HIS

Answer 23

méthode pour purifier les protéines recombinantes

Question 24

Principe du marquage poly-HIS

Answer 24

ajout de résidus d’histidine à l’extermité de la protéine (N ou C). Protéines marquées sont retenues et élués. Marqueur enlevé par enzyme

Question 25

2 types de marquage fluorescent

Answer 25

1) fusion transcriptionnelle
2) fusion traductionnelle

Question 26

C’est quoi la fusion transcriptionnelle dans le marquage fluorescent

Answer 26

technique qui permet l’étude de la régulation du gène en remplacent le gène d’interet par gène codant pour protéine fluorescente

Question 27

C’est quoi la fusion traductionnelle dans le marquage fluorescent

Answer 27

ajout d’un gène qui code pour une protéine fluorescente au gène d’interet (création de protéine chimérique)

Question 28

3 types d’endonucléases (ciseaux moléculaires)

Answer 28

1) nucléases à doigt de zinc
2) nucléases effectrices de type activateur de transcription (TALENs)
3) système CRISPR-cas9

Question 29

c’est quoi l’édition génomique

Answer 29

endonucléases modifiées qui introduisent des coupures double brin à un endroit précis

Question 30

2 mécanismes de réparation des coupures double brin

Answer 30

1) jonction d’extrémités non homologues
2) recombinaison homologue

Question 31

2 composantes de l’édition génomique ZFN et leur rôle

Answer 31

1) doigt de zinc qui reconnait des triplets de nucléotides précis
2) FokI: rare enzyme de restriction où l’activité de nucléase est séparée de l’activité de reconnaissance

Question 32

2 composantes fusionnées pour créer TALENs et leur rôle

Answer 32

partie TALE- partie capable de reconnaitre portion d’ADN spécifique
Partie N: capable de couper brin d’ADN (nucléase)

Question 33

Principe de TALENS

Answer 33

après que l’ADN est coupé, un gène cible peut être enlevé et remplacé par un nouveau gène réparé. Plus pratique que ZFN mais plus couteux que CRISPR

Question 34

Principe de CRISPR

Answer 34

fragements d’ADNdb viral intégrés dans loci particulier et si la cellule rencontre un ADN étranger identique, l’ADN sera détruit par enzymes