Processamento Histológico Flashcards
(44 cards)
quais sao as 3 etapas ?
● Desidratação: realizada pelo etanol, sendo que este tem concentrações a 70%, 96% e 100%, pois queremos que
exista uma remoção progressiva da água e não uma retirada abrupta da
mesma, senão ocorrem distorções.
● Diafanização ou Clarificação: realizada pelo xileno, sendo que este só tem uma concentração.
● Impregnação: realizada pela parafina, sendo que esta à temperatura ambiente é solida e, primeiramente, precisamos de aquecê-la para que esta possa penetrar nos tecidos. O meio de impregnação deve ser o mesmo que o de inclusão.
como ocorre a saida de reagentes durante o processamento histologico ?
anteriormente os orgaos foram colocados em formalina para fixar. depois dos fragmentos ja cortados vamos colocar em etanol para retirar a formalina, depois em xileno para tirar o etanol e por ultimo em parafina para tirar o xileno.
o que é a desidratacao ?
- Na desidratação utilizamos concentrações crescentes de etanol (70, 96 e 100%).
- Etapa que sucede a fixação.
- Primeira etapa do processamento histológico, se a fixação for considerada como processo de conservação.
Nota: Há autores que consideram que a fixação está inserida no processamento
histológico. - Objetivo: retirar a água existente nos tecidos (água da solução aquosa de formalina),
pois a água é incompatível com a parafina que é o agente final deste processo.
o que é o metodod quimico ?
Na desidratação, o método químico trata-se da utilização de solventes orgânicos que
apresentam uma grande solubilidade com a água, permitindo a extração e substituição desta.
O desidratante ideal é:
* Solúvel em água.
* Solúvel em parafina.
Se fosse possível termos um desidratante simultaneamente solúvel em água e em
parafina, ou seja, um desidratante ideal, fazia-se a passagem direta da desidratação para a
impregnação.
o que é o etanol ?
- C2H6O
- Forma “pura” – etanol/álcool absoluto (a 100%). No entanto, normalmente, pede-se etanol 99,5% no limite 99,8% para os laboratórios, o que não é na verdade
completamente álcool absoluto. - Muito solúvel em água.
- O mais utilizado em AP como agente desidratante.
- Etanol “industrial” possui elevado grau de impurezas – mas é considerado 100% puro
para AP. - Inflamável e volátil.
- Provoca uma retração no tecido e endurecimento (rápido), especialmente o mais puro (a 100%).
- Não é miscível com a parafina (e por isso é que precisamos depois do xileno).
- Etanol 70% - provoca menor retração – os fragmentos podem permanecer durante mais tempo.
Nota: Existem 12 etapas e a etapa onde podemos deixar os fragmentos permanecer
mais tempo é no etanol a 70%, porque este tem ainda uma boa quantidade de água,
não ocorrendo efeitos nefastos para os tecidos. - Etanol 95% devolve as cores dos tecidos, anteriormente à fixação – bom para tirar
fotografias.
o que é o isopropanol ?
- C3H8O
- Álcool isopropílico (tipo de álcool mais puro que o normal)
- Inflamável
- Ação mais lenta e tolerante que o etanol – menor retração dos tecidos (sendo, por isso,
um reagente mais estável). - Não dissolve os corantes solúveis em etanol.
- Não é miscível com a parafina.
- Não dissolve a celoidina (meio de impregnação/inclusão).
o que é acetona ?
- CH3(CO)CH3
- Propanona.
- Pode utilizar-se como agente desidratante quando a rapidez é um fator importante. No
entanto, uma desidratação muito rápida leva a que as desvantagens apareçam também muito rápido, logo a acetona não é muito utilizada pela razão apresentada no último ponto*. - Inflamável.
- Muito volátil.
- Mais rápida que o etanol.
- Não é miscível com a parafina.
- *Tem tendência a endurecer os tecidos, se a desidratação for longa.
o que é dioxano ?
- C4H8O2
- 1, 4-Dióxido de dietileno
- Agente desidratante ideal, sendo solúvel tanto na água comona parafina.
- Altamente inflamável.
- Perigo de explosão (peróxidos).
- Muito tóxico por inalação e via cutânea.
- Preço muito elevado.
o que é tetrahidrofurano ?
- OC4H8
- Óxido de dietileno, Óxido de tetrametileno ou THF.
- Agente desidratante ideal, sendo solúvel tanto na água como na parafina.
- Altamente inflamável.
- Perigo de explosão (peróxidos).
- Menos tóxico que o dioxano.
- Ação muito rápida.
- Danifica pouco os tecidos.
o que é a diafanização ?
- Consiste na substituição do agente desidratante no tecido, normalmente etanol, por um
solvente da parafina. - É um processo de clarificação, uma vez que após a sua ação os tecidos ficam transparentes (provocado pelo elevado índice de refração).
o que é xileno ?
- C6H4(CH3)2
- Dimetil benzeno.
- A solução comercial é constituída por uma mistura de orto-, meta- e paraxilol.
- Diafanizador mais utilizado no processamento e coloração.
quais sao as vantagens e desvantagens do xileno ?
Vantagens
* É o mais rápido (30 min. a 1h).
* Endurece pouco os tecidos.
* Eliminação fácil dos tecidos.
* Fácil observação do fim do processo (manualmente).
* Não dissolve a celoidina.
Desvantagens
* Aclara os tecidossomente a partir do etanol absoluto (pois este não é miscível em água).
* Endurece os tecidos por exposição longa.
* Tendência para endurecer tecidos fibrosos, musculares e cartilagíneos.
* Torna os tecidos quebradiços.
* Tendência para acidificar. Por este motivo só colocamos o fragmento até ao tempo
estritamente necessário.
o que é tolueno ?
- C6H5CH3
- Metil benzeno
- Considerado o diafanizador ideal por muitos técnicos.
quais sao as vantagens e desvantagens do tolueno ?
Vantagens
* É rápido (1 a 2h).
* Endurece menos os tecidos que o xilol.
* Não torna os tecidos quebradiços.
* Tolerância de mais de 12h para os tecidos.
* Fácil observação do fim do processo.
* É mais volátil que o xileno, sendo esta uma forma de ser eliminado depois da parafina.
* É mais tolerante à contaminação da água.
Desvantagens
* Aclara os tecidos somente a partir do etanol absoluto.
* Tendência para acidificar, no entanto, tem maior tolerância à água do que o xileno.
quais sao as vantagens e desvantagens do benzeno ?
Vantagens
* É relativamente rápido (1 a 3h).
* Endurece muito pouco os tecidos.
* Não torna os tecidos quebradiços.
* Provoca pouca retração.
* É muito volátil, evapora-se rapidamente do banho de parafina, diminuindo a frequência de mudança desta.
Desvantagens
* É cancerígeno, afeta sobretudo sangue e medula óssea, podendo a longo prazo
desenvolverem-se anemias.
* Endurece tecidos fibrosos, músculo e tendões.
* Difícil manutenção do nível de volume nos processadores abertos.
* Não é muito utilizado.
quais sao os fatores que inflenciam a desidratacao e a diafanizacao ?
- Concentração do agente desidratante
- Volume dos agentes desidratantes e diafanizadores
- Tamanho e consistência do fragmento
- Duração
- Temperatura
- Vácuo
- Agitação
quao importante é a concentracao do desidratante ?
Para uma desidratação o mais completa possível é necessário:
* Imersões com concentrações crescentes – método gradual (70, 96 e 100), para evitar
retração.
* Últimas imersões com a substância no estado puro, sendo que, assim, nos certificamos que vamos remover toda a água.
* Mudança periódica: a água retirada dos fragmentos vai diminuir a concentração.
Temos 3 recipientes a 100%, pois é o reagente no estado mais puro. O primeiro
recipiente a 100% retira a água que resta dos fragmentos, o seguinte ainda retira alguma água do fragmento e o último é aquele que retira completamente a água que ainda possa existir.
Assim, queremos assegurar-nos que não existe água em nenhuma zona, senão o xileno não conseguirá penetrar nessa zona, ficando lá um buraco.
quao importante é o volume dos agentes desidratantes e diafanizadores ?
- Quanto maior a quantidade de fragmentos, maior será a quantidade de substância a ser
utilizada. - Quanto maior o número de imersões → maior eficácia.
- Imersão de grande volume VS imersões de volumes pequenos.
Várias imersões em vez de uma só são mais eficazes.
A água é mais densa que o etanol, portanto no caso do recipiente maior, como não
haverá agitação por 3 horas as cassetes que estão no fundo vão estar em contacto com água esse tempo todo e, em consequência, vão estar sempre hidratadas.
Logo, é preferível passar de volume pequeno em volume pequeno do que ter apenas
uma imersão única num grande volume.
Já no caso da diafanização (onde se tira etanol e se coloca xileno), o xileno é mais denso
que o etanol. Não é benéfico ter agitação, porque o que se deseja é que o xileno esteja sempre em contacto com as cassetes e que o etanol esteja mais no topo do recipiente.
quao importante é o tamanho e consistencia dos fragmentos ?
- Fragmentos maiores – difusão dos reagentes mais difícil.
- Maior quantidade de água/etanol.
- Lípidos: maior dificuldade de penetração dos reagentes.
- Tecidos fibrosos e densos são mais difíceis.
como deve ser calculada a duracao da desidratacao e diafanizacao ?
- Duração: o tempo necessário até equilibrar as proporções água/etanol ou etanol/xileno.
- Quando o equilíbrio é atingido (proporção igual) retiram-se os fragmentos de forma a
minimizar a retração e o endurecimento. - Etanol 100% – fragmentos quebradiços.
Nota: Dentro do processamento histológico é preferível deixar os nossos fragmentos em etanol a 70% que é o que tem mais água, sendo esta o componente natural dos tecidos.
como influencia a temperatura ?
- Aumento da temperatura acelera as reações.
- Aumenta os efeitos negativos: retração e endurecimento.
- Aumenta o perigo de incêndio.
- A evaporação do agente desidratante, mais volátil que a água, leva à hidratação.
como influencia o vacuo ?
- Não tem efeitos na duração das etapas.
- Ajuda a retirar o ar dos tecidos.
como influencia a agitacao ?
- Influencia a desidratação, sendo benéfico.
- Agitação constante: desidratação mais rápida e eficiente.
- Sem agitação: a água é mais densa deposita-se no fundo do recipiente – fragmentos
hidratados. - A agitação durante a diafanização possui efeitos negativos.
- O xilol é mais denso que o etanol.
- Não agitar permite que o diafanizador fique separado do etanol.
quais sao os efeitos de tempo a excesso e tempo a menos nestas etapas ?
- Permanência longa: endurece excessivamente o tecido (verificamos que está duro
durante a microtomia). - Permanência curta: os efeitos fazem-se sentir nas etapas seguintes a curto ou a longo
prazo (verificamos durante a microtomia e no arquivo).
