PSV IV Flashcards
(37 cards)
def vésicules extracell
vésicule dérivée de membranes cell sécrétée dans le milieu extracell
membrane extracell
bicouche lipidique d’origine membranaire
des protéines sont enchâssées dans cette membrane:
-complexe CMH
-Marqueurs cell
contenu ou cargo des vésicules extracell
protéines
acides nucléiques
acides aminés
origine de ces vésicules
de tous les types cell
toutes les cellules en produisent
localisation des vésicules
tous les liquides biologiques
fonction des vésicules
outil de communication
signaux échangés:
-positifs
-négatifs
pour les chercheurs elles sont une source d’information via reconnaissance de leurs types de membranes, cette origine inclut le type cell mais également l’état de la cell d’origine
types de vésicules extracell
exosomes
microvésicules
corps apoptotiques
exosome
petites vésicules extracell
30-200nm
trop petite pour les voir au MO
formées par des phénomène d’exocytose et de relargage
microvésicules
taille supérieur à 200nm
formées par bourgeonnement
corps apoptotiques
encore de plus grande taille
hétérogénéité des vésicules extracells
-mécanisme de biogénèse
-types cell d’origine
-état fonctionnel des cells qui les produisent
-diversité cargo
-diversité fonctions
isoler les vésicules extracell
-des cultures in vitro: on récupère le surnageant
peut concernés les microorganismes car unicell
-des fluides biologiques:
-sang : il y a beaucoup de vésicules extracell
-l’urine
-des organes et tissus
en clinique isolement
prélèvement sur une cohorte
taille et densité rendent difficile l’isolement , la taille des vésicules et proche de celle des VLDL et des Chylomicrons
densité proche de celles des HDL
proximité avec des caractéristiques de lipoprotéines
méthode d’isolement , être adaptée en fct de la source et des objectifs de recherche, on doit doubler le critère taille par le critère densité
méthodes d’isolement
purifier les vésicules
il faut que la technique soit rapide et reproductible
chromatographie par exclusion de taille
filtrations
utilisation de colonnes de chromatographie , où se trouve une phase stationnaire pourvue de pores au travers desquels seules les petites particules passent comme les vésicules
on peut faire une chromatographie basées sur la charges
ultracentrifugation différentielle
centrifugation à très grande vitesse
centrifugation successives, on fait à chaque fois centrifugé le surnageant
ultracentrifugation avec un gradient de densité
pls solutions d’un produit non réactif de densité croissante
ségrégation des constituants cells en étages de densité
ultrafiltration
filtre qui ne laisse pas passer les VE
précipitation
polyethylène , glycol
précipitation physico-chimique
immuno isolation capture sur des perles
billes recouvertes d’anticorps dirigés contre les protéines membranaires des VE , les billes capturent les vésicules
technique émergentes
fractionnement asymétrique de flux de champ-flux
méthodes de detection et analyse
étudier les VE et leurs constituants membranaires mais également leur cargo
types cell similaires mais d’état différent
microscopie
microscopie électronique:
-TEM
-Cryo-TEM
depuis plus récemment la microscopie à force atomique ou AFM
la microscopie permet l’analyse en particulier de la taille et de la orphologie des vésicules
mais ces techniques de microscopie sont difficiles à mettre en place nécessitent des plateformes dédiées, du temps de préparation et de manipulation de l’argent
Western Blot
anticorps dirigés contre des prot
on réalise une migration des protéines dans un gel avant le transfert sur un membrane de détection des protéines d’intérêt par des anticorps spécifiques
la migration dépend de la taille
peut être utilisé pour étudier les protéines de membrane des vésicules mais également son cargo
