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Semaine 5 Flashcards

(63 cards)

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1
Q

Sur quoi sont basées les techniques d’immuno-essai?

A

Interactions entre l’antigène et l’anticorps

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Q

Qu’est-ce que permet le système bi-phasique (phase soluble et solide) des immuno-essais? (4)

A
  • Séparation
  • Purification
  • Détection
  • Quantification
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Q

Nommer la première technique développée des immuno-essais.

A

Radioimmunoessai

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4
Q

Sur quoi est basé un radioimmunoessai?

A

Compétition entre un antigène purifié radiomarqué et une solution qui contient lʼantigène à doser

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5
Q

Le radioimmunoessai est-il qualitatif ou quantitatif? Pourquoi?

A

Quantitatif : il repose sur une courbe d’étalonnage. Plus la radioactivité est faible, plus il y a d’antigène

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6
Q

Le radioimmunoessai permet de quantifier des anticorps ou des antigènes?

A

Antigènes

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7
Q

Que faut-il pour faire un radioimmunoessai? (4)

A
  • Anticorps spécifique pour lʼantigène fixé à un un substrat solide
  • Lʼantigène pur et radiomarqué
  • Antigène pur non-marqué en quantité connue (référence)
  • Un échantillon à analyser
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8
Q

Expliquer le principe de l’hémagglutination.

A

Chaque anticorps spécifique va lier 2 globules rouges ensemble, ce qui va former une tapis dans le fond du puit. S’il n’y a pas d’anticorps spécifique, les globules rouges vont rester dans le fond du puits.

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9
Q

Comment est calculé le titre d’un sérum?

A

Inverse de la plus grande dilution donnant une réaction positive

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10
Q

Nommer une application du test d’hémagglutination

A

Vérification de l’efficacité d’un vaccin contre l’Influenza

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11
Q

Donner 2 exemples de couplage lors d’immunoprécipitations (quelles billes peuvent être utilisées?)

A
  • Billes dʼagarose couplées aux Protéines A ou G (séparation par centrifugation)
  • Billes magnétiques couplés au ac. secondaires (séparation sur aimant)
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12
Q

Différentier les chromophores des fluorochromes.

A
  • Chromophores : composés qui absorbent la lumière

* Fluorochromes : re-émettent la lumière après excitation

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13
Q

Nommer 2 technologies issues de la fluorescence.

A

Microscopie à fluorescence

Cytométrie en flux

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14
Q

Qu’est-ce qu’est la cytométrie en flux?

A

Appareil qui va capter et même trier les différentes cellules selon les anticorps de différentes fluorescences (couleurs)

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15
Q

Que permet la cytométrie en flux?

A

Analyse de populations de cellules

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16
Q

Comment s’appelle le graphique issu de l’analyse des données de la cytométrie en flux?

A

Le dot-plot

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17
Q

Quel est l’avantage de regarder des résultats de cytométrie en flux sous la forme d’histogramme?

A

L’aire sous la courbe correspond au nombre de cellules.

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18
Q

Selon quel principe peut-on trier les cellules en cytométrie en flux?

A

En leur attribuant des charges

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19
Q

Avec quoi est couplé l’anticorps dans un ELISA?

A

Enzyme qui sera colorée plus tard

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20
Q

Différentier l’ELISA indirecte du sandwich.

A

Indirecte : Ag - Ac - Ac marqué

Sandwich : Ac - Ag - Ac marqué

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21
Q

Pourquoi est-ce important d’ajouter un agent de saturation dans les ELISA?

A

Pour éviter que les anticorps adhèrent de façon non-spécifique à la paroi du plastique

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22
Q

Comment se fait l’amplification du signal des ELISA?

A

Ajout d’un substrat incolore qui va réagir avec l’enzyme de l’anticorps et faire une forte coloration

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23
Q

Nommer 2 avantages de l’ELISA en sandwich

A
  • Pas de purification de l’antigène nécessaire

- Très spécifique (utilisation de 2 anticorps monoclonaux)

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24
Q

C’est quoi les essais multiplexes?

A

Utilisation de la cytométrie en flux pour faire plusieurs ELISA en même temps (anticorps reliés à des billes). ELISA en sandwich

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25
Décrire brièvement les étapdes d'un Western Blot
1. Migration de protéines sur SDS-PAGE 2. Transfert des protéines sur une feuille polymérisée 3. Ajout d'anticorps spécifiques couplés avec des enzymes 4. Exposition des bandes
26
Nommer 3 façons de détecter le VIH
- ELISA - Western Blot - PCR pour détecter l'ARN du virus
27
Expliquer le principe du ''dip-stick assay'' ou du lateral flow (test de grossesse)
Même principe qu'un ELISA sandwich. L'antigène (hormone de grossesse) va rencontrer des anticorps marqués spécifiques, puis par capillarité, le complexe va rejoindre une ligne d'anticorps fixés reconnaissant aussi l'antigène.
28
Comment peut-on vérifier si un test de grossesse a bien fonctionné?
Regarder la ligne de référence. Les anticorps fixés reconnaissent les premiers anticorps qui se lient à l'antigène et portent le marqueur coloré
29
Où se développent les cellules T et B?
Cellules B: moelle osseuse Cellules T: thymus
30
Quels sont les objectifs du développement des cellules B? (2)
- Expression d'un seul BCR/ cellule B (Exclusion allélique) | - Maximiser les chances de produire un BCR
31
Quelles sont les 4 phases du développement des cellules B?
1. Réarrangement VDJ des précurseurs B 2. Reconnaissance du soi = élimination des cellules B immatures 3. Reconnaissance du non soi = activation 4. Cellules B activées -> Plasmocytes et cellules mémoires
32
Quelle est la fonction du récepteur pré-B?
Vérification de l'existence d'une chaîne lourde fonctionnelle.
33
Quel est le mécanisme qui permet à la cellule de survivre après la production d'une chaine lourde lors de la phase 1 du développement des cellules B?
1. Fabrication de la chaine lourde (après VDJ) 2. Ajout d'un surrogat de chaine légère 3. Migration de la chaine lourde vers lla surface de la cellule 4. Association à IgB et Iga 5. Signal de survie (ou mort si pas d'association)
34
Quelles sont les deux sous-unités du surrogat qui remplace la chaine légère?
- VpréB | - Lambda 5
35
Quelles sont les étapes de la première phase du développement des cellules B?
1. Réarrangement VDJ du locus VH et vérification d'une chaine lourde fonctionnelle 2. Prolifération (Rentabiliser chaine lourde) et réarr. VL (lambda ou kappa)
36
Qu'est-ce que l'exclusion alléllique?
Ensemble de mécanismes qui assurent qu'une cellule B exprime seulement 1 type d'Ac (BCR)
37
Comment se fait la formation des chaines légères lors de la phase 1 du développement des cellules B?
1. À l'aide de l'exclusion allélique, il y a une recombinaison VJ du gène kappa sur 1 seul allèle 2. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène kappa sur l'autre allèle 3. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène lambda sur premier allèle 4. Si récepteur non fonctionnel, il y a une recombinaison VJ du gène lambda sur l'autre allèle 5. Si récepteur non fonctionnel, apoptose
38
Quels sont les 3 mécanismes d'élimination des cellules B autoréactives?
1. Délétion clonale (apoptose) 2. Anergie (ne réagit pas) 3. "Receptor editing" (VL)
39
Décrivez le "receptor editing".
Si une cellule B "adolescente" reconnait le soi, elle a l'opportunité de continuer la recombinaison des éléments VJ qui restent de la chaine légère Si continue à reconnaitre le soi = mort Sinon, maturation
40
Qui a découvert les cellules T?
Jacques FAP Miller
41
Quelles sont les 4 phases du développement des cellules T?
1. Réarrangement des gènes de TCR dans les cellules précurseurs de cellules T 2. Vérification de la reconnaissance du CMH et de la non-reconnaissance des antigènes du soi 3. Activation par rencontre d'antigènes dans les organes lymphoïdes secondaires. 4. Prolifération et migration pour éliminer l'infection
42
Pourquoi le développement des cellules T est-il plus compliqué que celui des cellules B?
- 2 type de cellules T (CD4/CMHII, CD8/CMHI) - Besoin d'une sélection positive pour la reconnaissance du CMH - Besoin d'un sélection négative pour la non-reconnaissance d'un antigène du soi.
43
Ou se déroule le développement des cellules T?
Dans le thymus.
44
Où se déroule les mécanismes de sélection précoces des cellules T?
Le cortex du thymus
45
Où se déroule les mécanismes de sélection avancé des cellules T?
La médulla du thymus
46
Comment s'appelle les cellules T au début de leur développement?
Thymocytes
47
Comment sont guidé les thymocytes?
À l'aide de chimiokines
48
Qu'est-ce que des cellules double négative?
Des cellules T en devenir qui n'ont pas de CD4 et de CD8
49
Qu'est-ce que des cellules double positive?
Des cellules T en devenir qui exprime du CD4 et du CD8
50
Qu'est-ce qu'une mort par négligence?
Une cellule double positive qui ne détecte pas le CMH va mourir.
51
Qu'est-ce que l'Aiguillage de ligné?
La différenciation des cellules double positives en simple positive. CD4 ou CD8 dépend de l'affinité du TCR pour le CMHI ou II.
52
Qu'est-ce que des cellules simple positive?
Des cellules T en devenir qui exprime du CD4 ou du CD8
53
Décrivez les mécanismes impliqué dans la maturation des cellules double négatives jusqu'à l'expulsion des cellules T du thymus. (11)
1. Cellule double-négative 2. Réarrangement TCR(bêta) 3. Checkpoint pre-TCR 4. Prolifération 5. Réarrangement TCR alpha 6. Cellules double positive 7. Mort par négligence (95%) 8. Sélection positive/négative (négatif = liaison trop forte au CMH) 9. Aiguillage des lignées 10. Simple positif 11. Expulsion du thymus.
54
Qu'est-ce qu'un TCR bêta?
C'est l'équivalent des chaines lourdes des Ig qui se fait par recombinaison VDJ. Il y a aussi de l'exclusion allélique.
55
Combien de temps prend la maturation des cellules T?
3 semaines
56
Décrivez le checkpoint pre-TCR
1. Réarrangement de la chaine bêta 2. Association de pT(alpha) à la chaine bêta 3. expression du pre-TCR à la surface et association au CD3. 4. Signal de survie
57
Vrai ou Faux. L'expression de CD3 est très faible.
Vrai
58
Vrai ou Faux. lors du réarrangement TCR bêta, il y a de l'exclusion allélique
Vrai
59
Vrai ou Faux. lors du réarrangement TCR alpha, il y a de l'exclusion allélique
Faux, car la plupart des cellules double positives meurent par négligence
60
Qu'est-ce que la sélection négative?
Les cellules T meurent si: - Interaction du thymocyte trop forte avec le CMH - Reconnaissance spécifique des peptides du soi
61
En quoi sont importante les cellules épithéliales médullaires?
Ces cellules sont utiles lors de la sélection négative des cellules doubles positives. À l'aide du facteur de transcription AIRE (autoimmune regulator), elles expriment des protéines de la périphérie/autres organes (expression ectopique)
62
Quel maladie héréditaire autoimmune est causé par un défaut génétique de AIRE?
APECED (autoimmune endocrinopathy-candidiasis-ectodermal dysplasia) Défaut de la sélection négative.
63
D’où viennent les précurseurs de cellules T qui arrivent dans le cortex du thymus?
Les veinules

Immuno (6 decks)

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