serologie Flashcards
(44 cards)
SEROLOGIE k čemu je
- Umožňuje nám zjistit patogen pomocí specifických protilátek
- Protilátky se stanovují z krevního séra, likvóru, moči, slin
- Buněčná imunita se využívá v TUBERKULÍNOVÝM TESTU (= test na TBC)
POZITIVNÍ = MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
-> Červená pokožka
NEGATIVNÍ = BEZ REAKCE
VÝHODY SEROLOGIE
- Sledování odezvy organismu
- Využíváme pro MO, které:
- Nemůžeme kultivovat
- Viry (HBV, vzteklina, coronavirus, EBV, HIV, HCV…
- Někteří paraziti (např. Toxoplasma gondii)
- Atypické bakterie (Mycoplasmy, Chlamydie)
- Spirochety (Treponema palladium, Borellia afzelii/garinii)
- …
- Jsou moc nebezpečné na kultivaci či je kultivace moc náročná
NEVÝHODY SEROLOGIE
- Detekujeme protilátky ne MO
- Organismus nemusí tvořit protilátky
- Protilátky se mohou tvořit i bez MO
- Protilátky jsou v séru dlouho i po prodělané nemoci
- Falešná pozitivita/negativita
PROTILÁTKY mohou být:
o Protein
o Glykopeptid
o Polysacharid
o …
Specifické protilátky (imunoglobuliny):
- IgA
- IgG
- IgM
- IgD
- IgE
IgA
o neutralizuje antigen
o tvořen z 2 podjednotek (z 2 Y)
o na kůži a na sliznici (v potu, mazu, sekretech…)
o vznikají brzy po kontaktu s antigenem
o Dimér (2Y = složený ze dvou podjednotek)
IgE
o důležitý při alergii (alergické reakce)
o paraziti
o monomer
IgM
o veliká molekula
o pentamér = skládá se z 5 podjednotek (z 5 Y)
o neprochází placentou
- průkaz protilátek IgM u novorozence vždycky znamená nitroděložní infekci plodu
o protilátka akutního typu (akutní infekce) teď probíhá nemoc
o Tvoří se jako první po kontaktu s MO
IgG
o Vzniká pozdě
o Monomér (1Y)
o Anamnestické protilátky (rekonvalescenční = po nemoci)
o skládá se z 1 podjednotky, malá molekula, jedna Y
o prochází placentou a chrání děťátko i v prvních 6 měsících života proti infekcím
o Pokud má matka IgG protilátky proti určité nemoci, přejdou placentou do těla miminka a chrání ho i v prvních měsících života
o Dlouhá životnost Je to Ig, který ukazuje již prodělanou nemoc (kdysi či nedávno, ale již je po nemoci)
- Někdy IgG zůstávají i celý život
IgD
o Důležitý pro vývoj imunitního systému
o Uvolnění histaminu
o Monomér (1Y)
IgM+ a IgG- ?
akutní fáze
IgM- a IgG+ ?
anamnestická fáze (rekonvalescence)
IgM- a IgG- ?
nikdy neprodělaná nemoc
IgM+ a IgG+ ?
chronická infekce, pozdní fáze
REAKCE ANTIGENU S PROTILÁTKOU
- Specifická: nevidíme ji
- Nespecifická:
* Změna struktury Ag
* Můžeme makroskopicky pozorovat (něco se např. vysráží)
- Kvalitativně – jestli je přítomna protilátky
- Kvantitativně – jestli je přítomna protilátka a kolik jí je
Vždy potřebujeme k reakci:
- Antigen (Ag)
- Specifickou protilátku (Ab)
- Vehikulum = nosič (ERY, Latex…), medium (roztok 0,8 % NaCl)
ANTISÉRA
Monoklonální Ab
o Jsou stejné (z jedné buňky)
o Rozpoznávají pouze jeden epitop antigenu
o Drahé
o Velmi specifické
Polyklonální Ab
o Trochu pozměněné
o Rozpoznávají (jsou namířené) proti více epitopům určitého antigenu
o Levné
o Z více různých buněk, můžou být různý
Epitop = je malá oblast molekuly antigenu, kterou rozeznávají imunitní receptory
AVIDITA
= síla (pevnost) vazby antigenu
- Afinita vyjadřuje sílu interakce jednoho vazebného místa s jedním antigenem
- Avidita vzrůstá s afinitou jednoho vazebného místa pro jeden antigen a s počtem simultánně se uplatňujících vazebných míst
- Proto může například pentamer IgM, protilátky s deseti vazebnými místy, vázat antigeny s velmi velkou aviditou, ačkoliv afinita jednotlivých vazebných míst bývá malá
- V první fázi infekce je její hodnota nízká
- Vyzrávaní imunitní odpovědi má za následek tvorbu plazmatických buněk, které tvoří protilátky cíleněji a zároveň dochází ke kompetici o antigen
- Protilátky s vyšší afinitou vychytávají antigen snáze a rychleji
- To se v konečném důsledku projeví vzestupem avidity protilátek v pozdější fázi infekce
VYSOKÁ (velká síla vazby) = anamnestické protilátky (rekonvalescentní), pozdější fáze infekce
NÍZKÁ (nízká síla vazby) = protilátky akutní fáze, nevyzrálé protilátky
TITR
= poslední pozitivní ředění
- Kvantitativní
SEROLOGICKÉ TESTY
- AGLUTINACE
- KFR (KOMPLEMENT FIXAČNÍ REAKCE)
- PRECIPITACE
- WESTERN BLOT (WB)
- ELISA
- FLUORESCENČNÍ IMUNOESEJE
Co to je Aglutinace, co vzniká a její dělení
= Ag + Ab -> vznikne nerozpustitelný produkt (aglutinát, je viditelný okem) + čirá tekutina
- Dělíme na:
- Přímá
- Zpětná
- Nepřímá
- Přímá hemaglutinace
- Nepřímá hemaglutinace
- Latexová aglutinace
Aglutinace se může dělat na 2 způsoby:
* Kvalitativní:
- Oko
- Aglutinoskop
- Zkumavka – chuchvalce - Sklíčko – sype se to
- Kvantitativní:
- Např. v séru je koncentrace 1:1800 je to pozitivní, měří se přesné množství vzniklých imunokomplexů
- Media, kde jsou protilátky či antigeny rozpuštěný:
- Fyz. roztok
- Fyz. roztok + pufr (F2PBS)
- Roztok bílkovin (albumin…)
- BSA, HSA - Dextram
TYPY přímé aglutinace
Widalova reakce
* Detekujeme protilátky proti Salmonelle
Wrightova reakce
* Detekujeme protilátky proti Franciselle a Brucelle
Weilova-Felixova reakce
* Detekujeme protilátky proti Listerii
Přímá aglutinace
- Detekujeme přímo protilátky
- Zjišťujeme proti bakteriálnímu onemocnění
- Nepřímý průkaz MO
POZITIVNÍ = VZNIKNE „CHUCHVALEC‘‘ -> AGLUTINÁT
NEGATIVNÍ = BEZ REAKCE
Zpětná aglutinace (=sérotypizace) a její typ
- Hledáme Ag
- Používáme u Salmonelly, E.coli, Shigella
- Určujeme Ag neznámého MO antisérem
Kaufman-Whiteova schéma (všechny kombinace O, H antigenů)
