Brainscape's Knowledge GenomeTM


Top Flashcards (Certified)
All Flashcards

Biomoleculaire > Techniques de base en biologie moleculaire > Flashcards

Techniques de base en biologie moleculaire Flashcards

(121 cards)

Start Studying
1
Q

Est ce qu’une variation du genome est elle forcement pathologique ?

A

nope

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Quelles analyses ne necessitent pas de consentement signe ?

A

Analyse pour variation genetique sur cellule somatique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Dans quelles classes y a t il la plupart des variation ?

A

1 et 2
Benigne et probablement begnine

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

A quoi servent les bases de donnees?

A

Localisation du variant dans une regio codante ou intronique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Classe 1 et 2 consequences

A

Sans consequence fonctionnelle

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Quelles classes ont des criteres de pathogenecite ?

A

4 et 5

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Quelles sont les categories de variations ?

A

Variation de petite taille
Macolesion ou macromutation de plus grande taille

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Exemple de variation de petite taille

A

Petites insertions / deletions

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Quelle technique d’analyse utilise t on pour les variations de petite taille?

A

Biologie moleculaire classique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Quelle technique pour les macrolesion ?

A

Cytogenetique classique
Cytogenetique moleculaire
Biologie moleculaire

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Les 3 axes de ce cour

A

Extraction et dosage des acides nucleiques
Prinicpaux outils d’analyse
Principales techniques d’analyse

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

(plan) 2 parties dans les techniques d’extraction

A

Technique de ref au phenole chloroforme
Extraction des ARN totaux

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

(plan) 2 parties dans les techniques de dosage

A

Dosage par fluorimetrie
Dosage par spectrometrie

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

(plan) 3 parties dans les principaux outils d’analyse

A

Methodes separatives
Enzymes: Nucleases
Oligonucleotides

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

(plan) Parties dans les principales techniques d’analyse

A

Amplification PCR
Hybridation moleculaire
Sequencage
Illustrations

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Pour quels cellules peut on faire une extraction ?

A

Toutes sauf les globules rouges

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Pourquoi on ne peut pas faire d’extraction avec les globules rouges ?

A

Non nuclees

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Quel est le critere pour faire une extraction ?

A

Qualite et quantite d’acides nucleiques extraits

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

Principales etapes d’une extraction

A

1) Lyse des cellules + dissociation nucleosomes
2)Denaturation des proteines
3)Inactivation des nucleases
4)Purification des acides nucleiques ADN ou ARN

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

Quelle est la technique d’extraction de reference ?

A

Celle au phenol-Chloroforme

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

Autres techniques d’extraction

A

Kits commercialises
Automates
FTA cards

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

Etapes d’extraction de technique de reference

A

1) Lyse des cellules

2) Extraction = deproteinisation

3) Precipitation alcoolique -> adn sous forme solide (pelote)

4)Dissolution dans l’eau

5)Dosage= verification de qualite

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
22
Q

A quoi correspond l’extraction dans la technique de ref ?

A

2e etapes
deprotonoisation

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
23
Q

Sous quelle forme est l’adn lors de la precipitation alcoolique dans la technique de ref d’extraction ?

A

Solide

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
24
Particularite de l'arn
Tres fragile
24
Comment on analyse la qualite de l'arn extrait?
Sur bioanalyseurs
25
Difference dans la technique au phenol chloroforme lors de l'extraction d'arn totaux
La dissolution dans l'eau est faite dans de l'eau depourvue de RNAases
26
Quels sont les 2 bioanalyseurs pour analyser la qualite de l'arn extrait ?
Rapport ARNr18S/ARNr28S Score Rin
27
Marge de mesure du score rin
1 a 10
28
Pour de l'arn extrait de qualite quel est le score rin ?
Proche de 10
29
Le score Rin est utilise dans quels types d'analyses ?
Analyse de biologie moleculaire
30
Principe du dosage par fluorimetrie
Ajout d'un intercalant fluorecent -> mesure de la fluorecence -> mesure de la concentration en acides nucleiques -> dosage des proteines
31
Quelle est la technique de dosage la plus utilise ?
Par spectrophotometrie
32
Principe dosage par specrophotometrie
Concentration d'acide nucleique proportionelle a l'absorbance
33
Quel est le rapport utilise pour mesurer la qualite du dosage en spectrophometrie ?
DO260/DO280
34
Pour que l'extraction en dosage (?) soit de qualite le rapport DO260/DO280 doit etre compris entre ...
1,7 et 2
35
2 methodes separatives
Electrophorese Electrophorese capillaire
36
Principe de l'electrophorese
Separation des fragments sous l'effet d'un champ elecrique
37
Principe de l'electrophorese capillaire
Gel inclus dans des capillaires fins
38
Avantages de l'electrophorese capillaire
Sequenceurs Consommation minimale d'echantillons
39
Quelle methode de separation est pratique pour les personnes a adn peu isolables (immunodeprimes et adn tumoral circulant)? Et pourquoi?
Electrophorese capillaire Car consommation minimale d'echantillons
40
Quel est le role des nucleases?
Coupure des liaisons phosphodiesthers
41
Action des endonucleases (nucleases)
Coupure des liaisons phosphodiesthers a l'interieur des sequences
42
Quels sont les endonucleases pour l'adn?
DNases
43
Quels sont les endonucleases pour l'arn ?
RNases
44
Quelles endonucleases sont des enzymes de restrictions ?
DNases
45
Caracteristiques des enzymes de restriction
Produites par les bacteries Coupent au niveau des sites de restrictions= sequences palindromiques
46
C'est quoi les sites de restrictions pour les enzymes de restriction ?
Sequences palindromiques
47
Quelle est la nuclease utilise dans le sysreme crispr cas9?
Nuclease CA9
48
Principaux outils d'analyse
Methodes separatives -> Electrophoreses Nucleases Oligonucleotides
49
Quelle methode est une technique d'edition du genome ?
Crispr cas9
50
Action de crispr cas9
Modif sequence/ regulation d'expression => de n'importe quelle cellule
51
Caracteristiques de nuclease cas9
Systeme de defense immunitaire de la bacterie Outil precis
52
Par quoi est guidee cas9 ?
Fragment d'aRn
53
Cas 9 peut faire quelle type de cassure ?
Simple ou double
54
Action de cas9 precisement
Deletion de gene Insertion de gene
55
En quoi cas9 est pratique pour la reactivation d'une fonction ?
Insertion d'un gene
56
En quoi cas9 est pratique pour les maladies genetiques ?
Deletion de gene
57
Oligonucleotide de synthese
Petite molecule simple brin d'adn ou ou arn de synthese
58
2 utilisations des oligonucleotides
Sous forme de sondes Sous forme d'amorces
59
Les 2 techniques utilisants des oligonucleotides sous forme de sondes
Hybridation moleculaire Librairies pour NGS
60
3 techniques utilisants des oligonucleotides sous forme d'amorces
PCR RT-PCR Techniques de sequencage
61
Principales techniques d'analyse
Amplification des ac nu. in vitro : PCR Hybridation nucleaire Sequencage des ac nu
62
Principe du PCR
amplification exponentielle d'une sequence d'adn nucleaire
63
Comment il est l'adn dans le pcr ?
Double brin
64
Ou est effectue le pcr ?
in vitro
65
A l'aide de quelle adn poly on fait le truc pcr?
Adn polymerase thermostable
66
Comment on fait une amplification d'une sequence d'adn double brin ?
Par extension de 2 amorces
67
Quel est le cycle de 3 etapes du pcr?
1) Denaturation de l'adn 2) Hybridation des amorces 3) Elongation
68
Comment on hybride les amorces lors du pcr ?
Fixation des amorces de part et d'autre de la region a amplifier
69
Qu'est ce qu'on utilise dans l'elongation des amorces dans le cycle du pcr ?
des dNTPs
70
Qu'est ce qu'on fait pour l'enlongation des amorces dans le cycle pcr ?
Synthese d'un brin complementaire par Adn polymerase thermostable
71
Qu'est ce qu'on utilise en pcr ?
2 amorces dNTP ADN poly thermostable
72
Qu'est ce qu'on utilise en Rt-pcr ?
ADN poly retroscriptase ARN dependante Amorce
73
Quel est le but du Rt-pcr? Principe ?
Obtenir un adn a partir d'un arn Transcriptase inverse
74
Rendement theorique du pcr
2**n n etant le nombre de cycles
75
2 types de pcr
en point final Real time pcr
76
Types de quantifications en real time pcr
absolue-> Charge virale relative-> Niveau d'expression d'un gene
77
Par quoi est catalyse le rt pcr ?
Transcriptase inverse
78
But du pcr digital
Quantification absolue
79
Sur quelle adn on peut faire du pcr digital ?
Foetal
80
La technique de Beaming c quel pcr ?
pcr digital
81
Interet du pcr digital
Sensibilite accrue
82
Quel pcr utilise en cas de faible franction allelique d'un variant ?
pcr digital
83
Types de sondes en Hybridation mol
ADNc Ribosondes aRn Oligonucleotides
84
Principe de l'hybridation mol
Reperer specifiquement une ou qlq sequences dans un melange complexe d'ac nucleique ?
85
Quel est le type d'hybridation (en milieu liquide?) sur membranes ?
Southern Blot Northern Blot Western Blot
86
Southern Blot->Hybridation sur quoi ?
Sur membrane Complexe adn/adn cible
87
Northern Blot->Hybridation sur quoi ?
Sur membrane Complexe adn/arn cible
88
Westhern Blot->Hybridation sur quoi ?
Sur membrane Complexe Acide nucleique/ proteine cible
89
Etapes d'un southern/ northern blot
1)Clivage adn genomique 2)Depot de Fragments sur un gel d'agarose 3)Transfert de fragments sur membrane 4)Incubation avec sonde marquee 5)Revelation
90
Quelle technique pour trouver le risque de maladie chez un enfant en comparant avec le genome de ses parents ?
Southern blot
91
Interet des puces adn
Analyse de l'expression genique Detection d'anomalies genetiques
92
Fonctionnement puces a adn
Extraction a partir d'un echantillon Puis amplification Marquage Incubation avec la puce Presence de sondes hybrides avec le support
93
Technique de ref en sequencage des ac nucleiques
Sequncage de Sanger
94
Sur quoi repose le sequencage de Sanger ?
Electrophorese capillaire
95
Etapes du sequencage de Sanger
1) Amorcage 2) Polymerisation 3) Obtention de Fragments de longueur variable
96
Qu'est ce que permet l'electrophorese capillaire dans le sequencage de Sanger ?
Reconstitution de la sequence recherchee
97
Autre technique de sequencage
NGS (haut debit )
98
Si 2 pics de couleurs dans l'analyse par electrophorese capillaire durant le sequencage de Sanger =>
Heterozygote avec mutation
99
A quoi correspond l'etape d'amorcage dans le sequancage de Sanger ?
= Hybridation de l'amorce apres denaturation
100
A quoi correspond l'etape de polymerisation dans le sequancage de Sanger ?
Elongation de l'amorce Par and poly + dNTPs Ou arret d'incorporation d'un didesoxynucleotide
101
Principales techniques illustrees
Southern Blot HRM (High resolution Melling)= Genotypage RELP=Polymorphisme de restriction Digital pcr et Adn tumoral / foetal circulant Puces a ADN
102
Caracteristiques de l'adn mt
Circulaire double brin (brin lourd et leger )
103
1 mitochondrie = combien de mol d'ADN mt
2 a 10
104
Ou est l'adn mt?
Matrice mitochondriale
105
Quelle techniques peut on utiliser pour les etudes familiales ?
Southern Blot
106
Quelle technique pour analyse de l'adn Mt?
Southern blot
107
Sur quoi repose le HRM ?
Techniques de PCR en temps reel
108
Quelle technique pour la recherche de variations au niveau des cytochromes en pharmacogenetique ?
HMR
109
Quelle technique utilise la discrimination allelique?
HRM (genotypage)
110
Sur quoi repose le polymorphisme de restriction RELP?
Sites de restrictions enzymatiques et utilisation de sondes
111
Ou est retrouve l'adn circulant ?
Circulation sanguine
112
Origine de l'adn circulant
Cellule ayant relarguer leur contenu par necrose ou apoptose
113
Digital pcr et adn foetal -> prise de quoi ?
Sang plasmatique chez la mere
114
Quelle technique pour depistage non invasif d'une trisomie 21 foetal ?
Digital PCR sur adn foetal
115
Quelle technique pour detection des SNPs?
Puces a ADN
116
Technique de genotypage ?
HRM (Hight resolution melling)
117
Pour la recherche de predisposition de cancer on effectue un digital pcr sur quelles cellules ?
Lymphocytes
118
Sur quoi on peut faire une analyse genetique somatique en digital pcr ?
Adn tumoral
119

Biomoleculaire (4 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2025 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions