Técnicas celulares Flashcards
microscopio de luz
- visualiza por fotones
- aumento y poder de resolución
- límite de resolución: 0.2 micrómetros
a menor longitud de onda la resolución es mayor
tinción hematoxilina - eosina
interactua con mordiente (metal) como puente entre tejido y colorante
H: tiñe lo basófilo (lo ácido) de azul\morado NÚCLEOS, RIBOSOMAS, CROMATINA, ADN en gral
E: tiñe lo acidófilo (lo básico) de rojo/rosado TC, CITOPLASMA, COLÁGENO
procesamiento histológico
obtener
fijar con formaldehída
deshidrata
aclarar
impregnar en parafina fundida
seccionar
adherir al porta objetos
desparafinar
teñir
micro electrónico de barrido MEB
bombardeo de electrones que chocan y se registra una imagen en 3d
- límite: 3 nm
- usa preparados grandes
Mico electrónico de transmisión MET
bombardea con electrones, depende de cuánto traspasan las estructuras:
- electrondensas: oscuras
- electronlucidas: claras
visualiza preparados delgados
limite es el menor posible: 0.2 nm
inmunoistoqca e inmunofluorescencia
usa anticuerpos para reconocer una proteína de interés: sirve para identificar células por sus características moleculares
se une antígeno al anticuerpo 1, este al dos y una enzima q cataliza en color o en fluorescencia (fluoruros
fraccionamiento celular
se hace un homogeneizado del tejido para ver componentes celulares
por un centrifugado se separan por densidad
electroforesis
separa mezclas de proteínas y ácidos nucleicos
- se tienen q desnaturalizar (estructura primaria)
- se usa un control conocido para tener referencias
- se separan los elementos según su tamaño y cuánto logran avanzar
en dna: la matriz porosa (gel) de AGAROSA, van al polo positivo en cámaras horizontales
en prote: matriz porosa de POLIACRAMIDA, en cámaras verticales
los blot
- se usa una electroforesis primero para separar
- una mayor coloración indica mayor cc de prote o lo q sea
western blot
detecta PROTEÍNAS por anticuerpos
- se transfieren a una membrana de nitrocelulosa
- se una lo mismo q en IHQ (anticuerpos con enzima color)
southern blot
detección de DNA por sonda: secuencia de nucleotidos marcada que es compatible con la estudiada, se unen usando complementariedad de base
nothern blot
detecta RNA por sonda
PCR
amplificación in vitro de un fragmento de DNA
busca generar muchas copias del original
usa un termociclador
ETAPAS
1. desnaturalización: separar hebras a 94-95 grados
2. hibridación/alineación: se añaden cebadores (fragmentos complementarios de DNA) y se baja la T para q se unan (55 grados)
3. Extensión/elongación: se polimeriza a través de la polimerasa (enzima) a partir del cebador extremo 3’ hasta el 5’
aprox a 72 grados
se hace 20-40 veces
manipulación génica
SOBREEXPRESAR UN GEN: incorporar un gen q codifique la proteína por lisosomas o vehiculos virales
SILENCIAR UN GEN: knockdown son interferentes q impiden la traducción o degradan el mRNA q codifica
ELISA
Determinación cuantitativa de proteínas
inmunoprecipitación: precipita para ver cuáles hay
