Técnicas Moleculares Flashcards
(5 cards)
Em que níveis pode a variância genética ser medida/quantificada?
Na 1- sequência do ADN, 2- diferenças entre os tamanhos, 3- nas proteínas e nas 4- diferenças fenotípicas.
1- Variação na sequência de um fragmento de ADN
Aqui pretende-se extrair o ADN, amplificar e separar os fragmentos e sequência.
SNPs (single nucleotide polymorphisms) - substituições de bases que ocorrem no genoma (transição troca entre duas purinas ou duas pirimidinas; transversão troca entre purina e pirimidina; indel)
2- Variações nos tamanhos dos fragmentos de ADN
Para distinguir os tamanhos temos que usar as seguintes técnicas:
RFLP (Restriction fragment length polymorphim): corte do DNA com enzimas de restrição e posterior separação. Padrões característicos ao nível da espécie ou estirpe. Os perfis permitem observar pequenas alterações.
*mtDNA é o usado e é necessário aplicar técnicas de amplificação como PCR.
VNTR (Variable number tandem repeats): estas repetições ocorrem no DNA e são zonas não codificantes, adjacentes umas às outras. Micro 1-4), mini-satélites (5-100) e satélites (> 100)
RAPD (Random Amplified polymorphism DNA): usa-se primers aleatórios (até 10 pb) e observa-se variações mutacionais nos locais de ligação dos primers. Contudo, não diz onde se encontram as variações.
AFLP (Amplified fragment length polymorphism): mais confiável do que o RAPD, com o objetivo semelhante de amplificar fragmentos aleatórios. Técnica inversa do RFLP. Utiliza-se enzimas de restrição e amplifica-se com primers marcados. Observa-se variação entre indivíduos, consoante a presença ou ausência de bandas, como nos produtos de RAPD.
3 - Variação proteica
Existência de proteínas diferente, identificada e quantificada por eletroforese.
Alozimas: variantes de uma mesma enzima, codificada por diferentes alelos. funções semelhantes, mas alelos (formas alternativas do gene no mesmo locus (local onde o gene está no cromossoma) do mesmo gene.
Isozimas: Funções semelhantes, mas vêm de genes diferentes.
4 - Variação fenotípica.
Dificil encontrar variação fenotípica controlada por um gene. Exemplo: peixes ornamentais. Identificação visual pode ser importante na aquacultura
