Tipos De Muestras Para Estudios Y Método De Dx Moleculares Flashcards
¿Qué significa tándem?
Secuencia de 2 o + bases que se repiten varias veces
Diferencia entre VNTR y STR
VNTR: detección de polimorfismos en número de repeticiones en tándem
STR o SSR: secuencia de tipo microsatélite: unidades cortas de 1 a 6 pares de bases que se repiten en tándem un número elevado de veces
La diferencia de VNTR con STR es la repetición de polimorfismos
¿Qué es hibridación?
Proceso en dónde se unen 2 cadenas complementarias
¿Qué es PCR?
Reacción en cadena de la polimerasa
Localiza secciones definidas o genes que corresponden con virus en cuestión
Permite producción (amplificación) rápida de un segmento específico de ADN
RTPCR - cuantitativa
- Fluorescencia
- Retrotranscripción
Convencional - cualitativa
Pasos de PCR
- PCR:
- Desnaturalización
- Emparejamiento
- Extensión
- Electroforesis
Uso clínico PCR
Detección de dif agentes infecciosos difícilmente cultivables
Aplicación en detección de mutaciones puntuales, deleciones o inserciones (analizando longitud de PCR), incluso translocaciones
Reacción en cadena de polimerasa con transcriptasa inversa
Método para amplificación de ARN, para analizar expresión génica, sirve para analizar ARNm de cél
PCR se hace solo de ADN - para ciertos virus cuyo material genético tiene ARN o para medir expresión génica de ARNm se hace paso adicional - retrotranscripción (reversa) - se tiene ARN y se convierte en ADN - este recibe nombre de ADN complementario
Diferencias entre técnica PCR cualitativa y cuantitativa
Ambas se usan para el diagnostico de enfermedades
- Cualitativa
Función: franquear área que quiero amplificar
Ej. identificar patógenos o genes - Cuantitativa
Hay datos referentes a ciclos, en qué ciclo fue detectada la amplificación, cicle t = cantidad de ciclos que tiene la PCR (35-40), lo que varía es el umbral
Ej. seguimiento de tx de pacientes, identificar causa viral de px
¿Qué es CT y umbral?
CT: Número de ciclos necesario para que señal fluorescente cruce el umbral de detección; valor semicuantitativo, inversamente relacionado con ARN existentes
Umbral: punto mínimo de elongación para expresarse
¿Qué significa un CT alto y uno bajo?
CT bajo = mayor expresión de la carga viral del patógeno, menos ciclos
CT alto = menor carga viral, requirió más ciclos para llegar a umbral
Biopsia líquida
Menos invasiva y da mayor información
Se detecta
cfADN - ác nucleicos extracelulares circundantes (fuera/libre de cél)
ctADN - ADN tumoral circulante (dentro de cél)
CTC - células tumorales circulantes
Tecnologías para detección de ctADN/cfADN
ddPCR
BEAMing
CAPP-Seq
Tam-Seq
WES
WGS
WGBS-Seq
¿Qué significa SNP?
Polimorfismo de un solo nucleótido
¿En qué se basa RFLP?
En la identificación de diferencias en tamaño de fragmentos generados mediante restricción de endonucleasas
RFLP = detección de polimorfismo en longitud de los fragmentos de restricción
¿Qué es un microarreglo?
Chips de ADN, distribución ordenadas de genes en superficie de 4 cm2
Permite estudiar nivel de expresión de múltiples genes de forma simultánea
