APOPTOSE Flashcards
def role et localisation
def : Mort cellulaire programmée qui permet le maintien du nombre de cellules nécessaires pour assurer les fonctions de l’organe et l’élimination des cellules endommagées.
• Se différencie de la nécrose
• Il existe une dizaine de types de mort cellulaire comme : la nécrose, l’apoptose et l’autophagie.
maintien du nmbre de cellule grace a l’intégration de signaux :
- de survie cellulaire
- de mort cellulaire
cycle normal
cause de maladie
cycle normal : prolifération : production de cellules differenciees et fonctionnelle puis diferentiation ( acquisition de la fonction de la cellule) puis survie cellulaire (maintien des cellules differenciers), senescence
cause maladie : absence ou exces proliferation anomalie de la fonction et absence de de survie donc apoptose ou survie importante
durée moyenne de vie des cellules o Cellules intestinales o Globules rouges o Globules blancs neutrophiles o Plaquette o Peau o Cellules osseuses o Cellules nerveuses
o Cellules intestinales : 7 jours o Globules rouges : 3 mois o Globules blancs neutrophiles : 5 jours o Plaquettes :8 jours o Peau : 2 à 3 semaines o Cellules osseuses : 30 ans o Cellules nerveuses : non remplacées
mecanisme apoptose
Une fois que la cellule entre en apoptose :
• Condensation de la chromatine le long de l’enveloppe nucléaire
• Condensation du cytoplasme (pas de vacuole cytoplasmique)
• Bourgeonnement de l’enveloppe nucléaire
• Fragmentation de l’ADN
• modif de la repartition de pplipide
• activation hydrolyse cytosolique
• rupture mitochondrie
• fragmentation cellule
• Formation des corps apoptotiques = fragments de noyau + membrane nucléaire
• Phagocytose par les cellules avoisinantes DONC pas de réaction inflammatoire
deroulement necrose
cellule normal -> gonflement reversible : condensation au hasard de la chromatine -> gonflement irreversible du cytoplasme -> desintegration membranaire : création d’une inflammation par desintegration des organelles intracell et par rupture de la membrane
deroulement autophagie
absence de condensation de la chromatine, vacuolisation importante du cytoplasme, accumulation de vacuole autophagique, peu de phagocytose par les cellules avoisinantes in vivo
observation microscopte apoptose et nécrose
apo : coloration par le may grunwald giemsa = MGG
colore le noyau et autre element observable (condensation chromatine, absence membrane nucleaire, corps apoptique)
necrose : coloration par le bleu trypan : ne rentre que s’il a des trous dans la membrane cellulaire
etude viabilité cellulaire
marqueurs visible par fluoresence
méthode de mesure
cellule vivante, en apoptose, en necrose
lodure de propidium = marqueur vital :
- Rentre dans les cellules en nécrose : Colore le noyau
- Ne rentre pas dans les cellules dont la membrane plasmique est intacte : Cellules vivantes ou Cellules en apoptose
Anticorps couplé à lannexine V-FITC spécifiques de marqueurs de la membrane interne : Choix d’un anticorps spécifique de la phosphatidyl sérine externalisée dans la cellule en apoptose :
- Indique que les cellules sont entrées en apoptose de manière irréversible
- Cellule normale : phosphatidyl sérine sur la face interne de la membrane plasmique
Mesure, cellule par cellule, de la fluorescence émise en cytométrie de flux
Cellule vivante : An V négative et Ip ne rentre pas dans la cellule
Cellule en apoptose : An V + et IP ne rentre pas dans la cellule
Cellule en nécrose : IP rentre dans la cellule (IP+) et peuvent être an V +
caracteristique biochimique de la mort par apoptose
clivage inter-nucleosomique
CAD
- Par CAD : DNAse dépendante des caspases
- Lors de l’apoptose, l’ADN est clivé en fragments de 180 à 200 pdb
CAD : dependante du Mg2+
couple a ICAD, inhibiteur caspase
Caspase
fonction
Caspases :
il existe 11 prot
• Ce sont des protéases qui “coupent” les protéines après l’AA Asp (=Acide Aspartique)
• Caspases 3 :
active CAD en libérant ICAD : fragmentation ADN + inactive les enzyme de réparation d’ADN
• Caspases 6 :
dégrade les lamines
Caspase mécanisme d’action
- Caspases inactives sous forme de pro- caspases
- Clivage du « pro-domaine » : Changement de la structure secondaire de la protéine
- Séparation des sous-unités : Changement de la structure tertiaire de la protéine par repliement
- Liaison des sous-unités : Formation d’un complexe formé de 1 petite et 1 grande sous-unité + Association de 2 complexes
- Via des sites de liaison protéine-protéine
Voie extrinseque
signal de declenchement et cascade moléculaire intracell
Signal extracellulaire : protéines comme FAS-ligand, TNF ou TRAIL se lient à un récepteur membranaire spécifique.
- Activation de Death Domain (DD) ou domaine de mort
- Formation de DISC (death inducing signaling complex) :
- complexe proteique sous membranaire qui comprend : parti intracyto du recepteur, des proteines adaptatrice et la pro-caspase 8 - Activation successive de plusieurs caspases : dont pro caspase 8 en caspase 8 qui va active dautre prot comme caspase 3
- Apoptose
Voie intrinseque
signaux : dommage ADN ou stress
- « Activation » de la mitochondrie par des protéines intracellulaires telles que BAX.
- modification de la perméabilité membranaire de la mitochondrie :
1. Libération du cytochrome c
2. Fixation sur APAF-1
3. Formation de l’apoptosome : constitue par prot APAF-1 et plusieurs cytochrome c
4. Recrutement de la pro-caspase-9
5. Activation de la caspase-9
6. Activation de la caspase-3
7. Mort cellulaire par apoptose
interaction voie intrinseque voie extrinseque
voie intr et extr activent caspase 3
caspase 8 peut activer voie intrinseque par l’intermediaire de Bid
Regulateur voie intrinseque
La voie intrinsèque dépend de l’équilibre entre BAX et BCL (not BCL2)
• Les protéines de la famille BCL favorisent la survie des cellules
• Les protéines de la famille BAX favorisent la mort des cellules
• Elles forment des homo ou des hétérodimères
• Et se lient à la membrane de la mitochondrie
• Inhibent ou favorisent le relargage du cytochrome c
-Bcl 2 : inhibe relargage du cytochrome C et APAF1, Akt inhibe Casp 9, IAP inhibe Casp 9 et 3, Hsp 70 inhibe casp 3
