Altfragen Chromatografie Flashcards
(18 cards)
Beschreiben Sie die Dünnschichtchromatografie und die Berechnung des Rf-Werts!
Ablauf:
- Auftragung der zu trennenden Substanzen auf stationäre Phase
- Wanderung der mobilen Phase entlang der stationären Phase
- Molekülverteilung zwischen den beiden Phasen
- Trennung durch unterschiedliche Affinität zu den beiden Phasen (Substanz mit höherer Affinität zur mobilen Phase wandert weiter/schneller)
Berechnung Rf-Wert:
Substanzstrecke/Laufmittelstrecke
Beschreiben Sie die “Reversed phase” und nennen Sie Beispiele für mobile und stationäre Phase!
stationäre Phase unpolar, mobile Phase polar
- stationäre Phase: modifizierte Silicagel mit unpolaren organischen Resten
- mobile Phase: wässrige Pufferlösungen mit unterschiedlichen Anteilen an organischen Lösungsmitteln
Beschreiben Sie die “Straight phase” und nennen Sie Beispiele für mobile und stationäre Phase!
stationäre Phase polar, mobile Phase unpolar
- stationäre Phase: Silicagel, Kieselgur, Cellulose
- mobile Phase: organische Lösungsmittel (z.B. Chlorophorm, Hexan, Butanol)
Beschreiben Sie das allgemeine Funktionsprinzip der HPLC!
= spezielle Form der Säulenchromatografie (High Performance Liquid Chromatography)
- Partikel der stationären Phase sind sehr klein (3-10 μm)
- mobile Phase muss mit hohem Druck (200 bar) durch Säule gepresst werden
- Detektion durch Lichtabsorption, Fluoreszenz, chemische Reaktionen oder Radioaktivität
Auswertung im Chromatogramm
Beschreiben Sie das Funktionsprinzip der Gaschromatografie!
Anwendung: nur bei verdampfbaren Verbindungen (z.B. Bestimmung von Fettsäuren)
- mobile Phase: Gas (z.B. Helium)
- stationäre Phase: dünne Kapillare, an der ein dünner Flüssigkeitsfilm aufgebracht ist
- Datenaufzeichnung und Auswertung wie bei HPLC
Welche Chromatographie-Methode braucht man, um destilliertes Wasser herzustellen? Beschreiben Sie diese!
Ionenaustausch-Chromatografie
- funktionelle Gruppe (z.B. saure Gruppen wie Sulfonsäure oder Carbonsäure) sitzt
an Trägermatrix (z.B. Polystyren, Cellulose) und bildet nach Abgabe eines
H+ - Ions ein Anion
- Ersatz des H+ - Ions durch ein Na+ - Ion aus der mobilen Phase
- Ersatz des Na+ - Ions durch kationischen Analyt (X+)
-> kationische Verbindungen werden länger von der stationären Phase ferngehalten als nichtionische Verbindungen oder Anionen
Wie kann man HDL von anderen Substanzen (LDL) durch chromatographische Verfahren trennen?
Gaschromatografie, HPLC
Nach welchen Kriterien können Stoffe chromatographisch getrennt werden?
- Polarität
- ionische Wechselwirkung
- Molekülgröße
- Affinität
Was ist die Retentionszeit?
Verweilzeit eines Analyten in einer Trennsäule
Was ist der Rf-Wert?
gibt an, wie weit eine Substanz in Relation zum Laufmittel gewandert ist
- Werte zwischen 0 und 1
- Substanzstecke/Laufmittelstrecke
Dünnschichtchromatographie - Direktphase: Analyt enthält Glutamin und Alanin - welche der beiden Stoffe wandert weiter?
stationäre Phase polar, mobile Phase unpolar
- Glutamin ist sauer und polar, Alanin ist apolar, d.h. Alanin wandert weiter
Dünnschichtchromatographie - Umkehrphase: Analyt enthält Phenylalanin und Arginin - welche der beiden Stoffe wandert weiter?
stationäre Phase unpolar, mobile Phase polar
- Phenylalanin ist apolar, Arginin ist basisch und polar, d.h. Arginin wandert weiter
Wie heißen die 2 Phasen jedes chromatographischen Systems?
stationäre und mobile Phase
Bei welcher Chromatographie werden Antikörper benutzt?
Affinitätschromatographie
Nenne die Bestandteile einer HPLC-Anlage!
- Vorratsgefäß für Laufmittel
- Pumpe
- Injektionventil zum Einbringen der Probe
- Trennsäule
- Detektor
- Abfallgefäß für Laufmittel
- Computer mit Software zum Darstellen, Auswerten und Steuern der Geräte
Welche Aussage kann über einen Analyten mit dem Retentionswert 1 getroffen werden?
Analytstrecke = Laufmittelstrecke (z.B. wenn Laufmittel und Analyt beide sehr polar sind)
Welche funktionellen Gruppen werden beim Kationenaustauscher verwendet?
saure Gruppen, z.B. Sulfonsäure oder Carbonsäure
Welche Art von Chromatographie wird für flüchtige Stoffe benutzt?
Gaschromatografie
