Cours 17 Flashcards
(29 cards)
Ou se retrouvent les protéines CNX et CRT et qu’est-ce qu’ils reconnaissent?
2:00pm
CNX est une protéine membranaire dans le lumen
CRT est une protéine soluble dans le RE
Ils reconnaissent des protéines non-repliés à partir de leur Glc3-ManD1,C,4
Quel est le fonction de CNX et CRT
C’est d’assister les protéiens non natives dans leur repliement en empêchant leur agrégation
Comment les protéines repliés sortent du RE?
On lui enlève son dernier glucose
Que possède les CNX (ses domaines?, structure secondaire)
Un domaine lectine (recconait les oligosaccarides)
Ce qui est fait unfeuilet beta double stabilisé par Ca2+
Un domaine P qui est riche de proline
Contient 4 copies de deux motifs.
L’intersection entre les deux motifs dans le domaine P sont?
Des sites d’intéraction de thiol oxydoréductase (ce qui va former les ponts disulfures dans notre protéine non native).
Que possède CRT? (ses domaines, structure secondaire)
Un domaine lectine similaire au Cnx
Mais, elle possède deux feuillets beta recourbés avec un C -terminal en hélice alpha avec charges négative
Il y a un ion calcium entre les deux pour stabiliser la structure du domaine lectine (interagit pas avec l’hélice alpha)
Un domaine P mais avec 3 copies de chaque motif au lieu de deux.
Qu’est-ce que le calcium du CRT lie dans le domaine lectine?
Q,E,K et deux molécules d’eau
Qu’est-ce que le ITC nous a montré?
Il y a une forte affinité entre Glc1Man3 et le domaine MRH de CRT. La constante de dissociation est très basse.
Pourquoi le glucose est très important quand ca vient au CRT
Elle intéragit parfaitement avec le site de liaison.
Elle fait les laisons hydroènes partout
Son C2 equatoriel fait des intéractions hydrophobes.
Si remplacé par un mannose, cela ne sera pas possible.
Pourquoi le glucose est très important quand ca vient au CRT
Elle intéragit parfaitement avec le site de liaison.
Elle fait les laisons hydroènes partout
Son C4 equatoriel fait des intéractions hydrophobes (avec I et M)
Si remplacé par un mannose, cela ne sera pas possible.
Comment les mannoses C et 4 font des intéractions?
Intéraction avec un point disulfure
Interagissent avec un W
Des molcéules d’eau font des intéractions partout
Qu’est-ce que l’alignement de séquence de CRT et CNX implique?
Elle implique que les a.a pour les liaisons H et hydrophobes dans le site de liaison sont très bien conservées
Qu’est-ce que le KDEL et pourqoi elle est lié au lectine de Crt?
C’est un motif comme le chaperone Bip qui assure la séquestration de la protéine synthétisé dans le RE.
Comment le Glc final (3) est enlevé par un glucosidase?
C’est très enfoui dans la protéine. Donc, la protéine doit d’abord sortir de Crt avant le clivage du glucose.#
Deuxième article a rapport avec?
Tenter de comprendre l’activtié chaperone de Crt en comprenant la relation entre le domaine P et le lectine
Quel est le but du site de liaision de polypeptide du domaine lectine
C’est pour la suppression d’aggregation des protéines
Quelle protéine d’aggregation est utilisé dans l’étude?
C’est le fly luciferase (FL) non-glycolsiyés
Qu’est-ce que les résultats de dichroidisme circulaire nous montre?
Le Crt est un mélange de feuillet alpha et beta.
Quand on enlève des domaines du bras, ca devient un peu plus désordonnée
Le bras seul nous donne une strcture désordonnée
À partir des résultats de DC, on fait des courps de dénaturation thermique. Quels sont les résultats?
En présence de calcium, les structures contenant le lectine sont plus thermiquement stables (donc ils le lient)
En absence de arm1 et 2, la stabilitié ne change pas.
Mais le lectine seul est instable.
Qu’est-ce que les expériences de relative light scattering signifie? Plus de scattering = plus de suppresion d’agregation
Le CRT le supprime bien
Pendant que les bras tronqués arm1 et arm2 non.
Cela montre l’importance du bras (domaine P) pour la suppresion
Quels sont les peptides hydrophobes utilisés dans les expériences de suppression d’aggregation en présence de Crt
6KAAF et fCLV très hydrophobes donc bon substrat potentiel
KHP un peu moins hydrophobe
6KSGG est hydrophile donc sert comme controle négatif
Que donne les résultats de fluorescent light scattering avec les peptides hydrophobes
6kAAF et fdlv arrete la suppresion de l’aggregation
KHP a un effet moindre
6Ksgg fait rien
Que se passe avec les peptides 6KAAF et 6KSGG en présence des Crt avec des bras tronquées (fluoresence relative)
La fluoresence diminue pas beaucoup si on enlève les bras. Donc, le site de liaison polypeptide se retrouve dans la section lectine.
Comment l’anistropie de fluoresence fonctionne?
Plus la concentration de protéine est large, plus de liaison avec ligand
Le peptide est moins mobile
Donc l’anistropie de fluoresence augmente
