Cours 19 Flashcards
(27 cards)
Qu’est-ce que CEACAM1 (et leur structure)
Ce sont des molécules d’adhésion qui sont très glycosylées
Ils sont transmembranaires de type II (C-terminal cytosolique)
Posse un IgV et 3IGC
Peut soit etre C-terminal C (court) ou L (long, possède des immunoreceptor ITIM)
Le CEACAM peut intéragir avec quels molécules (Igv)?
IdV avec un CEACAM sur le meme cellule ou avec une autre cellule
Il faut arreter la dimérisation Cis pour l’activer
Quel est la stucture secondaire d’un IgV?
C’est un sandwich beta comprimé avec un feuillet ABED et GFCCC qui sont retenous par un pont salin
Quel est le but de l’article? (2 buts)
Savoir la face où se passe la dimérization
Savoir l’effet de glycosylation de nos IgV sur sa dimérisation
Comment les CEACAM1 IgV non-glycosylés sontproduits?
Dans des bactéries E.coli
Comment les IgV glycosylés (de 3 sortes de glycosylation) sont formés&
Dans des cellules HEK293S
Met le avec endoglucosidase pour enlever des glycasn si voulu
Comment les IgV non-glucylés sont observés en NMR?
On fait leur méida avec des 13N et 15C
Ensuite on fait HSQC de H et N
Comment les IgV glycoslés sont observés en NMR?
On substitue les alanines avec des 13N (ils sont assezz dispersés) et on prend son spectre HSQC (transfert d’aimentation vers nos 15N)
IMPORTANT: Qu’est–ce que les positions des alanines dans le spectre signifie?
Les positions changent presque pas donc la glycosylation ne change pas la structure 3D du IgV
Qu’est-ce que le temps de correlation (TauC) trouvé par HSQC?
C’est le temps que prend une molécule de tourner d’un radiant
= moitié de la masse de protéine en KDA
Les IgV non-glyc et glyc sont en monomères ou en dimères?
Non-glyc = monomère (6.5 ns) Glyc = dimère (12.5)
Est-ce que la présence de glycanes ajoute au TauC, donnant une fausse impression de dimérixation parfois?
Oui
Comment on sait que c’est probablement un monomère en cas de glycolysation GlcNAc2 (2 raisons)
Une essai avec des N-glycan complets montre que le rapport de temps de correlation est dépendent sur la masse des glycans directement (mais pas exact)
La concentration de N-glycan n’a pas un grand effet sur les temps de correlations
Qu’est-ce que la mutation de L18R dans ABED non-glycolysé signifie?
Il y a toujours la dimérization, donc ce n’est pas le site
Qu’est-ce que la mutation de I91R dans GFccc non-glycolysé signifie?
Les IgV se monomérisent, ce qui signifie que GFCCC est la face de dimérisation.
Comment le RDC fonctionne?
Le RDC est une intéraction directe entre deux noyaux qui ont un alignement partiel de leur champ magnétique.
Si on le compare avec la direction du champ magnétique externe, on peut voir l’orientation spatiale des liaisons (des protéines).
Quels est le point d’avoir des deux média pour RDC?
les deux médias sont utilisés pour trouver une axe de symétrie pour les dimères symétriques présentes. Ils donnent des orientations différentes de tenseur d’alignement.
Qu’est-ce que les graphiques de RDC observé vs. calculé nous montre?
Chaque point représente un 1H15N amide particulier.
Ca nous montre comment le dimère bouge de facon différente (alignement différente) dans plusieurs environnements
Avec des disques neutres (PEG) au lieu des phages (-), l’alignement n’est pas aussi large
Qu’est-ce que les valeurs Q (facteur qualité) nous montre pour les RDC? ) = correspondance parfaite
Pour A, c’est 0.30 et pour B c’est 0.29. C,est très bon et ca nous montre que notre IgV est bien conservé en solution.
Quel est le but de faire une projection Samson Flamstead? Comment ca fonctionne?
C’est pour trouver l’axe de symétrue de IdV dimérisé non-glycolysé.
Dans le cas d’un dimère dans un milieu légerement orientatant, l’un des axes de symétrie de la matrice (de tenseur d’alignemetn) DOIT coincider ave l’axe de symétrie du dimère, quel que soit le milieu.
Quel est la rhombicité?
C’est l’assymétrie du mouvement du tenseur d’alignement
Connaissant l’axe de symétrie, on a superposé ABED et GFCCC
ABED montre que les faces ABED se touchent s’ils serait en symtérie
Par contre GFCCC montre que la dimérization marche
Quels sont les points de contact qui font les dimères entre les GFCCC
V
La longue boucle C C prime possède les acides aminés:
F fait un empilement pi (important)
Les glycolysations sont loins de la face de dimérization. Comment ca cause la monom`risation?
C’est pensé de peut etre est faite par un effet lococal rpopagée.
