Cours 4 Électropho Flashcards
Qu’est-ce que l’électrophorèse?
La migration d’un ion dans un champ électrique pour séparer les molécules
qu’est-ce que l’électrophorèse sur gel?
Technique pour séparation des macromolécules (gel commun : agarose et polyacrylamide)
Les gels d’électrophorèse retardent quelles molécules?
Les molécules de taille plus grande (inverse de la filtration par gel)
Comment est appelé l’électrophorèse en gel de polyacrylamide?
PAGE
De où à où migrent les protéines?
Vers l’anode (+) selon leur ration chagre/masse
Si le gel serait très long, est-ce que cela serait mieux?
Oui, plus le gel est long, meilleure est la résolution
Comment augmenter la résolution et donc restreindre e les protéines dans des bandes plus minces ? (électrophorèse en pH discontinu)
En utilisant 2 gels
- gel de séparations (running gel)
- gel de concentration (stacking gel) -> par dessus (pH plus bas)
Comment avoir 2 gels aident l’électrophorèse?
- pH + bas du stacking gel augmente vitesse de migration des protéines
- passage du 1er au 2e gel ralenti les protéines -> compaction des protéines
Quel est l’important dans l’électrophorèse en pH discontinue?
la réduction dans les bandes macromoléculaires en rentrant
dans le gel de séparation augmente de façon très significative la résolution
Qu’est-ce que le gel SDS-PAGE?
technique où savons ou détergent par interactions hydrophobes, dénature structures d’une protéine.
qu’est-ce que SDS
Sodium dodecyl sulfate
que se passe-t-il au protéines en présence de SDS?
adopte une conformation étendue
Donc, que peut on en tirer si toutes les protéines sont lisses?
- le rapport charge/masse sera le même pour toutes les protéines
de même masse - la séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra
uniquement du phénomène de gel-filtration par les pores du gel
quelle méthode donne la meilleure résolution ?
SDS-PAGE
quels sont les deux avantages du SDS-PAGE
- dissous les agrégats (qui porraient bloquer)
- mobilité électrophorétique -> directement proport avec le poids moléculaire
résumé
