Cours 6 manipul ADN Flashcards
Quels sont les propriétés pyshico-chimiques pour purifiers les acides nucléotides?
- polymères dont la taille varie avec nombre nucléotides
- forte charge négative
- adoptent une structure double brin
est-ce que l’ADN est soluble dans l’eau ?
Oui, très
- molécule chargé
- peu de groupement hydrophobes
Solubilité varie avec conditions salines et substance organique
Quelle est la façon habituelle pour précipiter l’ADN ?
La précipitation à l’éthanol (ou isopropanol)
Qu’est-ce que l’extraction de l’ADN au phénol?
Méthode de partition de phase où les a. n. sont retrouvés dans la phase aqueuse et les protéines (dénaturées), partitionement dans le phénol (phase dense)
Pour l’extraction de l’ADN au phénol, quel doit être le pH du phénol?
Autour de 8
Électrophorèse de l’ADN, est-ce que les a.n pénètrent facilement dans les gels polyacrylamide?
non, difficilement, on utilise les gels d’agarose pour purififer et analyser les acides nucléiques
Comment fonctionne l’électrophorèse de l’ADN?
ADn chargé dans puits migrent vers anode
tampon EDTA pour inhiber nucléases (pH environ 8)
séparation selon masse (comme prots), dépend donc de la taille des fragments ADN
Visualisation de l’ADN dans le gel d’électrophorèse, quel colorant?
bromure d’éthidium (molécules aromatiques cationiques)
Chromatographique des acides nucléiques : quels sont les techniques (3)
- chromatographie par échange d’ions : échangeur anionique
- filtration sur gel : déssaler des oligonucléotides
- chromatographie d’affinité : purifier les ARNm des cell eucaryote
Ultracentrifucation et purification de l’ADN : quelle méthode couramment utilisé ?
Ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium
De quoi dépend la densité de flottaison de l’ADN dans l’ultracentrifufation et purificiation de l’ADN?
Dépend de sa composition en base selon : p = 1,660 + 0,098x
