Cours 8 : les technologies de l'ADN

Question 1

Nucléases clivent quoi?

Answer 1

Lien phosphodiester

Question 2

Exonucléase VS endonucléase

Answer 2

Enxo clive à PARTIR D’UNE EXTRÉMITÉ

Endo clive au MILIEU, produisant FRAGMENTS

Question 3

Certaines endonucléase de RESTRICTION (ou enzymes de restrictions) coupent l’ADN à des endroits caractérisés par une…?

Answer 3

SÉQ DE NUCLÉOTIDES SPÉCIFIQUES : SITE DE RESTRICTION

Question 4

Pk les bactéries ont des enzymes de restriction?

Answer 4

Servent à défense des bactéries contre virus en coupant ADN étranger en morceaux

Question 5

** les enzymes de restriction sont nommées selon…?

Answer 5

l’espèce de bactérie desquelles ont été isolées (ex. EcoRI = Escherichia COli souche Ry13)

Question 6

La plupart des enzymes de restriction reconnaissent des séqs…?

Answer 6

PALINDROMIQUES (se lient à l’envers comme à l’endroit)

Question 7

Quand les enzymes de restriction coupent ADN, il peut y avoir création de bouts __________ ou de bouts ________.

Answer 7

• collants (sticky ends)

- francs

Question 8

Une fois coupés par les endonucléases, les fragments d’ADN peuvent être séparés selon _________ par _________ sur ________. On applique un champs _________ et l’ADN chargé _______ migre vers le côté _________ du gel.

Answer 8

• taille
• électrophorèse
• d’Agarose
• électrique
• négativement
• positif

Question 9

Comment les peut-on différencier les morceaux d’ADN par gèle d’agarose?

Answer 9

Le morceaux plus lourds migrent plus lentement : les morcx plus petits seront donc plus vers le + que les plus lourds

Question 10

Quelle mol on utilise pour identifier les morcx d’ADN sur gel d’agarose?

Answer 10

bromure d’ethidium : mol fluorescente allant à l’INT DE DOUBLE HÉLICE

Question 11

Au laboratoire, on peut faire la création d’ADN RECOMBIANT en joignant n’importe quel fragment COMPATIBLES d’ADN grâce à…?

Answer 11

UNE LIGASE

Question 12

Bouts collant plus faciles à lier que bouts francs? Pk?

Answer 12

Oui, 100x, car bouts collants s’apparient, stabilisant interaction (francs = dépendants de collisions)

Question 13

** afin de perpétuer et produire l’ADN recombinant en qtt illimitée, on insert l’ADN dans un _______ qui peut se ________ de façon _________. Ceci est couramment connu comme le “_______”

Answer 13

• vecteur
• réplique
• autonome
• cloning

Question 14

** qu’est-ce qu’un “plasmide”?

Answer 14

CERCLE d’ADN pouvant se RÉPLIQUER DE FAÇON AUTONOME DANS ORGANISME HÔTE

Question 15

Quelles sont les séquences d’ADN requises dans un plasmide?

Answer 15

• ORIGINE DE RÉPLICATION
• GÈNE DE SÉLECTION (RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES)
• SITE DE MULTICLONAGE

Question 16

** À quoi sert le gène de sélection dans les plasmides?

Answer 16

à sélectionner spécifiquement les bactéries contenant le vecteur

Question 17

** Est-ce que l’efficacité de la transformation (introduction d’un plasmide dans bactérie souche) est bonne? Comment on la détermine

Answer 17

NON : 1/2000

Détermine en mettant dans milieu avec antibiotique

Question 18

** On peut utiliser clonage (insertion de plasmide) pour quoi en méd?

Answer 18

Création insuline et HGH (hormone de croissance)

Question 19

Pour une réaction de polymérisation in vitro, on a tjrs besoin de…?

Answer 19

• aller de 5’ vers 3’
• AMORCES (oligonucléotide ADN ou ARN)
• BRIN MATRICE SIMPLE PAR DÉNATURATION THERMIQUE (ou pH, mais tjrs thermique qu’on utilise)

Question 20

À quelle longueur d’onde on obtient ADN simple brin in vitro?

Answer 20

260 nm, car absorbe à cette longueur d’onde

Question 21

Quels nucléotides vont se désassembler plus difficilement?

Answer 21

C-G!!! (OH)

Question 22

Syn de “renaturation”

Answer 22

hybridation

Question 23

On fait l’hybridation en baissant la température/ramenant aux conditions normales?

Answer 23

OUI!

Question 24

** Comment se nomme la méthode de terminaison de chaîne la plus populaire?

Answer 24

Méthode de Sanger

Question 25

Syn de “hybridation”

Answer 25

renaturation

Question 26

** Quelle est la diff entre dNTP et ddNTP? Comment est-ce que ça affecte fct?

Answer 26

dNTP = désoxyribo… normal : élongation

ddNTP = didésoxiribo… a un H en 3’ au lieu d’un OH, ce qui empêche élongation : plus on le met tôt, plus l’élongation arrête tôt?

Question 27

Quel composé permet la terminaison de la chaîne dans la méthode de séquençage de Sanger

Answer 27

ddNTP

Question 28

** V/F?
On peut lire une séq d’ADN avec Sanger, en mettant ddATP, ddGTP, ddTTP, ddCTP… ceux-ci, avec plsrs échantillons d’ADN, vont arrêter élongation à leur nucléotide respectif et on va pouvoir lire.

Answer 28

V!!!!!!

Question 29

Les 3 étapes du cycle de PCR

Answer 29

1) séparation des brins : 98C
2) hybridation des amorces : 55C
3) synthèse par ADN polymérase d’E. coli : 37*C

Question 30

** Peut-on utiliser une autre polymérase que celle de E. coli pour PCR?

Answer 30

Oui : Taql ADN polymérase : 70-72*C

Question 31

** durée d’un cycle PCR

Answer 31

5 min

Question 32

**plus les amorces sont longues, plus elles sont…?

Answer 32

Spécifiques (moins de chances de reconnaître plus d’un endroit dans génome)

Question 33

Pour PCR, combien de copies d’ADN on a après 10, 20 et 30 cycles?

Answer 33

Environ : 1000, 1 000 000 et 1 000 000 000

Question 34

Qu’est-ce que des STR (nmbr de nucléotides, répétées combien de fois, localisation des répétitions, nombre de répétitions habituelles pour un indiv)

Answer 34

• 2-6 nucléotides
• 5-200x
• sur UN MÊME LOCUS
• VARIE dans un locus pour CHAQUE INDIVIDU

Question 35

Qu’est-ce que des VNTR (nmbr de nucléotides, répétées combien de fois, nombre de répétitions habituelles pour un indiv)

Answer 35

• 10-100 nucléotides
• 10-1500x
• VARIE dans un locus pour CHAQUE INDIVIDU

Question 36

Les STR et VNTR, dans la vie, peuvent servir à quoi

Answer 36

DNA fingerprint

Question 37

** Pour un test de paternité…

Si les deux copies VNTR et/ou STR n’ont pas le même nmbr de séqs répétées, on voit ______. Plus le STR ou VNTR testé est ____________, plus il est utile dans profilage génétique. En raison de plsrs polymorphismes, chaque personne a un ADN qui peut être _______ de l’ADN des autres individus.

Answer 37

• 2 bandes
• polymorphe
• distingué