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Biología molecular en la clínica > Diagnóstico molecular de patógenos > Flashcards

Diagnóstico molecular de patógenos Flashcards

1
Q

¿Qué es el diagnóstico molecular?

A

Aplicación de técnicas de biología molecular detectando y cuantificando secuencias génicas específicas

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Q

¿Cuáles son las etapas del diagnóstico molecular?

A
  • Preanalítica
  • Analítica
  • Posanalítica
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3
Q

¿En qué consiste la fase preanalítica?

A

Solicitud del análisis y recolección de la muestra

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4
Q

¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar la estructura genómica?

A

ADN

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Q

¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar la expresión génica?

A

ARNm

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6
Q

¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar genomas extraños?

A

ADN/ARN exógeno

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7
Q

¿En qué consiste la fase analítica?

A

Procedimiento de la muestra, determina, mide y describe la presencia o ausencia de sustancias

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8
Q

¿En qué consiste la fase posanalítica?

A

En la evaluación e informe

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9
Q

Menciona algunas características del diagnóstico molecular que lo hacen diferente al tradicional

A
  • Comprende la probabilidad de recurrencia real
  • Minimiza errores
  • Detección múltiple
  • Mayor sensibilidad y especificidad
  • Mayor rapidez
    -Limitaciones son costos más elevados y desregulación de oferta y calidad de los test
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10
Q

¿Que detectan las pruebas serológicas?

A

La presencia de antígenos y/o anticuerpos en el suero o fluidos corporales

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11
Q

¿Cuál es la diferencia entre una prueba directa e indirecta serológica?

A

Prueba directa detecta antígenos y prueba indirecta detecta anticuerpos

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12
Q

¿Cuáles son las características de la expresión génica espacial y temporal?

A

Espacial acorde a la célula y función que vamos a explorar y temporal acorde al estado metabólico del paciente

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13
Q

¿Qué son las pruebas secundarias serológicas?

A

Aquellas en las cuales la reacción antígeno-anticuerpo da lugar a una manifestación visible

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14
Q

¿Cuáles son las pruebas serológicas secundarias?

A
  • Prueba de precipitación
  • Prueba de aglutinación
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15
Q

¿En qué se basa la prueba de precipitación?

A

Miden la cantidad de antígeno o anticuerpo en los líquidos corporales a partir del grado de precipitación visible de complejos antígeno-anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución

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16
Q

¿Cuándo se produce la precipitación en la prueba?

A

Cuando la concentración de antígeno y anticuerpo es óptima

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17
Q

¿En qué se basa la prueba de aglutinación?

A

Las moléculas de anticuerpos se acoplan con los grupos antigénicos de las partículas del antígeno y actúan como puentes produciendo grumos visibles

18
Q

¿Cuáles son las pruebas serológicas primarias?

A

Aquellas en las cuales requieren de otro procedimiento para visualizar la reacción antígeno-anticuerpo

19
Q

¿Cuáles son las pruebas serológicas primarias?

A
  • Fijación del complemento
  • Inmunofluorescencia
  • Radioinmunoensayo
  • Pruebas inmunoenzimáticas (ELISA)
  • Inmunoelectrotransferencia (Western blot)
  • Inmunocromatografía
20
Q

¿Cuál es el fundamento de la prueba de fijación del complemento?

A

Utilización de una cantidad precisa de complemento sérico, la cual se utiliza de manera total en presencia de la reacción de un antígeno con su anticuerpo

21
Q

¿Cuál es el sistema indicador para saber si el complemento ha sido utilizado en la fijación del complemento?

A

La hemólisis de los glóbulos rojos en presencia del complemento

21
Q

Si en una prueba de fijación del complemento no ocurre hemólisis, ¿de qué nos estaría hablando?

A

Qué si hubo una reacción antígeno-anticuerpo la cual utilizó el complemento y por ello no queda complemento disponible para la hemólisis de los glóbulos rojos

22
Q

¿En qué se basa la inmunofluorescencia?

A

Se marca un anticuerpo con un compuesto fluorescente que al fijarse específicamente al antígeno se verá fluorescente

23
Q

¿Cuál es la interpretación de la presencia o ausencia de fluorescencia en una prueba de inmunofluorescencia?

A
  • Presencia de fluorescencia cuando ocurre la reacción antígeno anticuerpo
  • Ausencia de fluorescencia cuando el anticuerpo no se fija al antígeno
24
Q

¿En qué se basa la ELISA?

A

En la detección de antígenos o anticuerpos por medio de anticuerpos acoplados a una enzima y la utilización de un sustrato cromogénico

25
Q

Menciona las diferencias entre la ELISA directa, indirecta y sándwich

A
  • Directa: Busca detectar antígenos, se usa un anticuerpo primario ligado a una enzima que detecta directamente el antígeno
  • Indirecta: Busca detectar anticuerpos, se utiliza un anticuerpo secundario ligado a una enzima que detecta al anticuerpo primario el cúal se une al antígeno
  • Sándwich: Busca detectar antígenos, emplea dos anticuerpos que se unen a diferentes epítopos del antígeno, el anticuerpo ligado a la enzima se une al antígeno que previamente se unió a un anticuerpo de captura
26
Q

¿Cómo se expresan los resultados de una ELISA?

A

Se expresa en valores cualitativos, es decir positivo y negativo pero también se toma en cuenta la intensidad de la señal (colorimetría) la cual es directamente proporcional a la cantidad del antígeno capturado

27
Q

¿En qué consiste el radioinmunoensayo?

A

Un antígeno objetivo se marca radiactivamente y se una a sus anticuerpos específicos
Ocurre una competencia entre antígenos marcados y antígenos no marcados (no marcados son los que están presentes en la muestra del paciente) por los sitios de unión a los anticuerpos

28
Q

¿Qué se necesita para que haya radioactividad en el radioinmunoensayo?

A

Que el antígeno marcado radiactivamente se una al sitio de unión de un anticuerpo

29
Q

¿Qué significa una alta radioactividad en el inmunoensayo?

A

Indica que hay una alta cantidad de antígeno marcado y por lo tanto menor cantidad de antígeno del paciente

30
Q

¿Qué significa una baja radioactividad en el inmunoensayo?

A

Que hay una gran cantidad de antígenos del paciente, los cuales se unieron a los anticuerpos e impidieron que los antígenos marcados se unieran

31
Q

¿Qué es lo que detecta la prueba molecular Western Blot?

A

Proteínas

32
Q

¿En qué consiste el Western blot?

A

En la detección de proteínas por medio de anticuerpos monoclonales, donde la unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radioactivo o químico

33
Q

¿Cuáles son los pasos del Western blot?

A
  1. Preparación de la muestra
  2. Electroforesis en donde se separan las proteínas
  3. Transferencia de las proteínas separadas a una membrana
  4. Bloqueo
  5. Incubación del anticuerpo marcado, anticuerpo se pega a proteína específica
  6. Detección, se detecta unión por actividad enzimática o fluorescencia
34
Q

¿Cómo funciona la inmunocromatografía?

A

Hay una migración de una muestra a través de una membrana de nitrocelulosa, esta prueba permite visualizar la reacción antígeno-anticuerpo por acumulación del oro coloidal del conjugado en zonas específicas del papel donde se fijan previamente anticuerpos de captura

35
Q

¿Cuál es el proceso de la inmunocromatografía?

A
  1. Muestra se coloca en la membrana y esta migra a lo largo de la misma
  2. Antígenos se unen a anticuerpos marcados con oro coloidal
  3. Conjugado o complejo antígeno-anticuerpo se unen a los anticuerpos de captura
  4. La unión marca la línea de resultado positivo en la prueba
36
Q

¿Qué nos puede llevar a tener un falso negativo en una prueba molecular?

A
  • Muestra insuficiente
  • Fase temprana de la enfermedad
  • Acción de ADNasas o ARNasas
37
Q

¿Qué nos puede llevar a tener un falso positivo en una prueba molecular?

A
  • Contaminación de muestra
  • Combinación de muestras
38
Q

Modificaciones postraduccionales que pueden hacerse con Western Blot

A
  • Acetilación
  • Fosforilación
  • Citrulinación
39
Q

¿Cuáles son los tipo de ELISA más específico y porqué?

A

ELISA sándwich porque contienen 2 anticuerpos que se unen a dos diferentes epítopos de un mismo antígeno

Biología molecular en la clínica (14 decks)

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