DNA RECOMBINANTE Flashcards
(23 cards)
¿Qué es el DNA recombinante?
Es ADN formado por la combinación de secuencias de diferentes organismos.
¿Qué función tienen las enzimas de restricción?
Cortan el ADN en secuencias específicas, permitiendo manipular fragmentos.
¿Qué diferencia hay entre un corte romo y uno cohesivo?
El corte romo deja extremos rectos; el cohesivo deja extremos sobresalientes complementarios.
¿Qué tipo de enzima de restricción se usa en laboratorio y por qué?
Tipo II, porque corta justo en el sitio de reconocimiento palindrómico.
¿Qué mecanismo protege a las bacterias de sus propias enzimas de restricción?
La metilación del ADN por metilasas en adenina o citosina.
¿Qué es un vector en ingeniería genética?
Molécula de ADN que transporta genes de interés a una célula hospedera.
¿Por qué se usa la misma enzima de restricción en vector y ADN a insertar?
Para obtener extremos cohesivos compatibles que puedan unirse entre sí.
¿Qué ventajas tienen los plásmidos como vectores?
Son fáciles de manipular, se replican en bacterias y permiten selección por antibióticos.
¿Qué tipo de ADN pueden insertar los bacteriófagos?
Fragmentos de hasta 20 kb, con selección por formación de placas de lisis.
¿Qué son los cósmidos?
Vectores híbridos entre plásmido y fago que permiten insertar hasta 45 kb.
¿Qué son YAC y BAC?
Vectores artificiales de levaduras o bacterias usados para insertar fragmentos muy grandes de ADN.
¿Por qué se usan bacterias como hospedadores?
Crecen rápido, son baratas y fáciles de transformar.
¿Qué limitación tienen las bacterias como huésped?
No realizan modificaciones postraduccionales como glicosilación.
¿Qué ventaja ofrecen las levaduras como sistema huésped?
Son eucariotas, pueden modificar proteínas y replican vectores tipo YAC.
¿Cuáles son los pasos básicos de la clonación?
Corte del ADN, preparación del vector, ligación, transformación y selección.
¿Qué es la desfosforilación del vector y por qué es útil?
Eliminación de grupos fosfato para evitar que el vector se auto-ligue.
¿Cómo se hacen competentes las células bacterianas?
Tratándolas con CaCl₂ para aumentar permeabilidad a ADN.
¿Cómo se seleccionan las células transformadas?
Por genes de resistencia a antibióticos o genes marcadores.
¿Qué esperas observar si una ligación fue exitosa?
Crecimiento en medio selectivo y expresión del marcador del vector.
¿Qué consecuencia tendría usar enzimas de restricción diferentes para vector y ADN insertado?
Los extremos no serían compatibles y no se unirían correctamente.
¿Por qué es importante un sitio de clonación múltiple (MCS) en un plásmido?
Permite insertar fragmentos usando diferentes enzimas de restricción.
¿Qué observas si la transformación no fue exitosa?
No crecen colonias en el medio selectivo con antibiótico.
¿Qué indica la presencia de un promotor en un vector de expresión?
Que se busca transcribir el gen insertado y producir proteína.
