PCR Flashcards
(21 cards)
¿Qué significa PCR y quién la inventó?
Reacción en Cadena de la Polimerasa. Inventada por Kary Mullis en 1986.
¿Cuál es el objetivo principal de la PCR?
Multiplicar millones de veces un fragmento específico de ADN.
¿Qué componentes se necesitan para una reacción de PCR?
ADN molde, primers, Taq polimerasa, dNTPs, buffer con Mg²⁺, agua.
¿Qué hace la Taq polimerasa en la PCR?
Es una enzima termoestable que sintetiza nuevas cadenas de ADN.
¿Cuáles son las tres etapas de un ciclo de PCR?
Desnaturalización, alineamiento (hibridación), extensión.
¿Cuál es la temperatura típica de desnaturalización en la PCR?
95°C.
¿Cuál es la temperatura de extensión y qué ocurre en ella?
72°C, donde la Taq polimerasa sintetiza ADN.
¿Para qué sirve el cloruro de magnesio (MgCl₂) en la PCR?
Es un cofactor esencial para la Taq polimerasa.
¿Qué función tienen los primers?
Definir el inicio y fin del fragmento a amplificar en el ADN.
¿Cómo se calcula la temperatura de hibridación (Tm)?
Tm = (4 × G+C) + (2 × A+T).
¿Qué es la PCR múltiple?
Es una PCR que amplifica varios fragmentos distintos usando múltiples pares de primers.
¿Qué es la RT-PCR?
Es una PCR que primero convierte ARN en ADN complementario con transcriptasa reversa.
¿Qué detecta una PCR-RFLP?
Polimorfismos genéticos mediante PCR y digestión con enzimas de restricción.
¿Qué diferencia hay entre PCR estándar y qPCR?
La qPCR cuantifica ADN en tiempo real mediante fluorescencia.
¿Qué tipo de molécula usa SYBR Green para detectar ADN?
ADN de doble cadena.
¿Qué mide la cuantificación absoluta en qPCR?
La cantidad exacta de copias de un gen o ADN presente.
¿Qué es la cuantificación relativa en qPCR?
Compara la expresión de un gen con un gen de referencia estable.
¿Cuál es el orden correcto de las fases de un ciclo de PCR?
Desnaturalización – Alineamiento – Extensión.
¿Qué pasaría si no se agregan primers en la PCR?
La Taq polimerasa no puede iniciar la síntesis de ADN.
¿Por qué la Taq polimerasa es ideal para la PCR?
Porque resiste altas temperaturas sin desnaturalizarse.
¿Cuál sería un resultado esperado en gel tras una PCR exitosa?
Una banda visible del tamaño esperado del fragmento amplificado.
