Draft

Question 1

Japanese

Answer 1

English

Question 2

Good morning.

Answer 2

Good morning.

Question 3

自己紹介する

Answer 3

I’m Akihiro Kawashima from Showa University in Tokyo.

Question 4

感謝を述べる

Answer 4

Thank you for attending this presentation.

Question 5

発表テーマを述べる

Answer 5

Today, / I will be discussing how ADORA2B helps protect trophoblast cells from hypoxia-induced ferroptosis.

Question 6

妊娠初期、胎盤は低酸素下で発達する

Answer 6

In early pregnancy, / the placenta naturally develops under low-oxygen conditions due to limited maternal blood flow.

Question 7

低酸素は浸潤と胎盤形成を支援する

Answer 7

This hypoxia actually supports trophoblast invasion and placental development.

Question 8

10〜12週で酸素レベルが上がる

Answer 8

Around 10 to 12 weeks, / maternal blood begins to enter the intervillous space, / increasing oxygen levels.

Question 9

酸化ストレスが発生、適応が必要となる

Answer 9

This shift creates oxidative stress, / which trophoblasts must adapt to in order to maintain redox homeostasis.

Question 10

しかし、

この適応の遺伝的またはエピジェネティックな制御機構は

まだ明らかではありません。

Answer 10

Howevers,

the genetic or epigenetic controls of this adaptation

remain unclear.

Question 11

胎盤の適応のエピジェネティックなメカニズムを探るために、

私たちは以前、12週時点の絨毛絨毛（chorionic villi）における遺伝子プロモーターを調査しました。

その後に子癇前症を発症した女性から採取したサンプルを用いて。

Answer 11

To explore epigenetic mechanisms behind the placental adaptation, /

we previously studied gene promoters in chorionic villi at 12 weeks

from women who later developed preeclampsia.

Question 12

我々はハイパーメチル化されたプロモーターを同定しました。

その多くは酸化ストレス応答に関連していました。

特に、

アデノシンA2B受容体（ADORA2B）のプロモーターはハイパーメチル化され、

母体血漿中でも検出可能で、子癇前症リスクと強く関連していました。

Answer 12

We identified hypermethylated promoters,

many of them linked to oxidative stress responses. /

Notably, /

the promoter of the Adenosine A2B receptor (ADORA2B) was hypermethylated, /

detectable even in maternal plasma and strongly associated with preeclampsia risk.

Question 13

ADORA2Bは、低酸素条件下でヒポキシア誘導因子1αを介して典型的にアップレギュレートされます。

それは胎盤がこの環境に適応するのを助けます。
,
しかし、

抗酸化防御におけるその役割は、まだ完全には解明されていません。

Answer 13

ADORA2B is typically upregulated under low oxygen conditions via hypoxia-inducible factor 1 alpha.

It helps the placenta adapt to this environment.

However,

its role in antioxidant defence is still not fully understood.

Question 14

最近の研究で、ADORA2Bが抗酸化防御を強化することが示されています。

特に酵素グルタチオンペルオキシダーゼ4（GPX4）を介してです。

GPX4として知られています。

Answer 14

Recent studies have shown that ADORA2B enhances antioxidant defences,

particularly through an enzyme glutathione peroxidase 4,

or GPX4.

Question 15

GPX4は有害な脂質過酸化物を無害化します。

これにより、それらの蓄積が防がれ、

続いて起こる細胞膜の損傷が抑制され、

フェロプトーシスを引き起こすことがなくなります。

Answer 15

GPX4 neutralises harmful lipid peroxides.

This prevents their accumulation

and subsequent membrane damage

that triggers ferroptosis.

Question 16

フェロプトーシスは鉄依存性の調節された細胞死の一形態であり、

脂質過酸化物の蓄積を特徴とし、

特に細胞膜内で顕著に起こります。

Answer 16

Ferroptosis is an iron-dependent form of regulated cell death, /

characterised by the accumulation of lipid peroxides, /

especially within cellular membranes.

Question 17

ADORA2Bのシグナル伝達はGPX4の活性を高めます。

これはフェロプトーシス関連の損傷から胎盤細胞を保護するのに役立つかもしれません。

Answer 17

ADORA2B signalling boosts the activity of GPX4.

This may help protect placental cells from ferroptosis-associated damage.

Question 18

しかし、

ADORA2Bの発現低下がこの保護機構を損なうかどうかは依然として不明であり、

特に胎盤の初期ストレス時には。

Answer 18

Yet,

It is still unclear whether reduced ADORA2B expression compromises this protective mechanism,

particularly during early placental stress.

Question 19

この不確実性を踏まえて、

我々は、ADORA2Bの早期抑制が、

プロモーターの過剰メチル化によって引き起こされることが、

栄養膜細胞のフェロプトーシスへの脆弱性を高める可能性があると仮説を立てました。

Answer 19

Given this uncertainty,

we hypothesised that early ADORA2B suppression—

caused by promoter hypermethylation—

could increase trophoblast vulnerability to ferroptosis.

Question 20

このような脆弱性は、子癇前症の臨床症状が現れるはるか以前に胎盤の発達を損なう可能性があります。

これは、潜在的な早期治療のタイミングを示唆しています。

Answer 20

Such vulnerability might impair placental development well before clinical symptoms of preeclampsia appear. /

This highlights a potential early therapeutic window.

Question 21

仮説検証のためCT30細胞モデルを作成した

Answer 21

To test this hypothesis, / we used the CT30 trophoblast cell line, / comparing ADORA2B knockdown cells with controls.

Question 22

CoCl₂で低酸素を誘導し、FACで鉄過剰を誘導した

Answer 22

Hypoxia was mimicked using cobalt chloride to stabilise HIF-1α, / and iron overload was induced using ferric ammonium citrate (FAC).

Question 23

フェロトーシスを確認するためLip-1とFer-1を用いた

Answer 23

To confirm that cell death was due to lipid peroxidation, / we used Lip-1 and Fer-1, / well-known ferroptosis inhibitors.

Question 24

脂質酸化、生存率、細胞毒性、シスチン取り込みを評価した

Answer 24

We assessed four parameters—lipid peroxidation, / cell viability, / cytotoxicity, / and cystine uptake—as indicators of antioxidant capacity.

Question 25

まず、私たちは細胞の生存率と膜の完全性を評価しました。 低酸素かつ鉄に富む条件下で起こるフェロプトーシス由来の損傷を評価するためです。

Answer 25

First, we assessed cell viability and membrane integrity to evaluate ferroptosis-induced damage under hypoxic, iron rich conditions.

Question 26

左のグラフでは、細胞生存率が有意に低下していました。 ADORA2Bノックダウン細胞において、 鉄濃度が800マイクロモルを超える条件で。

Answer 26

In the left graph, viability was significantly reduced in ADORA2B knockdown cells at iron concentrations above 800 micromolar.

Question 27

中央のグラフでは、細胞生存率が部分的に回復しているのが観察されました。 これはフェロプトーシス阻害剤を投与した後のことです。 これらの知見は示唆しています 低酸素かつ鉄に富む条件下で見られる細胞死には、脂質過酸化が寄与している可能性があるということを。

Answer 27

In the middle graph, / partial restoration of viability was observed after treatment with ferroptosis inhibitors. / These findings suggest that lipid peroxidation contributes to the observed cell death under hypoxic, / iron-rich conditions.

Question 28

右のグラフでは、膜損傷の指標であるLDH放出が、 阻害剤投与後に減少しました。 これはさらに示しています 膜損傷がフェロプトーシスと関連しているということを。

Answer 28

In the right graph, / LDH release— a marker of membrane damage— was reduced following inhibitor treatment. / This further confirms that membrane damage is associated with ferroptosis.

Question 29

次に、私たちはBODIPY染色を使用しました。 脂質過酸化をモニターするために、 ADORA2Bノックダウン細胞において。

Answer 29

Next, we used BODIPY staining to monitor lipid peroxidation in ADORA2B knockdown cells.

Question 30

ご覧のとおり、 フェロプトーシス阻害剤であるLiproxstatin-1（Lip-1）を使用しない場合、 細胞は徐々に緑色に変化しました。 これは脂質感受性の色素が酸化されたことを示しています。 この色の変化は脂質過酸化物の蓄積を反映しています。

Answer 30

As you can see here, / without Liproxstatin-1 (Lip-1), / a ferroptosis inhibitor, / the cells gradually turned green, / indicating oxidation of the lipid-sensitive dye. / This colour shift reflects lipid peroxide accumulation.

Question 31

一方、 Lip-1処理により細胞は赤色を維持し、 脂質酸化が抑制されていることがわかります。

Answer 31

In contrast, with Lip-1 treatment, / the cells remained red, indicating suppression of lipid oxidation.

Question 32

右のグラフに示すように、 緑色から赤色への蛍光比は時間とともに徐々に増加し、 Liproxstatin-1（Lip-1）を添加していないノックダウン細胞で顕著でした。 このパターンは、フェロプトーシスに伴う脂質損傷の存在を示唆しています。

Answer 32

As shown in the right graph, / the green-to-red fluorescence ratio gradually increased over time in knockdown cells without Lip-1. / This pattern supports the presence of ferroptotic lipid damage.

Question 33

これらの知見をさらに発展させるため、 我々は特に細胞膜での脂質酸化に注目し、 膜損傷がフェロトーシス細胞死において重要であることが知られているからです。

Answer 33

To extend these findings, / we specifically focused on lipid oxidation at the plasma membrane, / as membrane damage is known to be critical in ferroptotic cell death.

Question 34

我々は48時間のライブセル・イメージングを行いました。 ノックダウン細胞を用いて、 膜特異的な脂質過酸化を可視化するためです。

Answer 34

We performed 48-hour live-cell imaging using knockdown cells, / to visualise membrane-specific lipid peroxidation.

Question 35

細胞膜は赤色で標識されました。 その後、酸化は可視化されました 赤から黄色への変化として。

Answer 35

Plasma membranes were labelled red. Oxidation was then visualised as a shift from red to yellow.

Question 36

この色の変化は、膜特異的な脂質過酸化を明確に示しています。 総合すると、これらの知見はADORA2Bノックダウン細胞においてフェロプトーシスが誘導されていることを示しています。

Answer 36

This colour change clearly indicates membrane-specific lipid oxidation. Together, these findings demonstrate that ferroptosis is induced in ADORA2B knockdown cells.

Question 37

ADORA2Bノックダウン細胞で膜脂質酸化の増加が観察されたことを踏まえて、 次にGPX4を検討し、 免疫蛍光染色を行って、 その分布を可視化しました。 対照細胞（左図）では、GPX4染色は滑らかで連続的でした。 対照的に、ADORA2Bノックダウン細胞（右図）では、斑点状に凝集しているように見えました。

Answer 37

Given the increased membrane lipid oxidation observed in ADORA2B knockdown cells, we next examined GPX4 by performing immunofluorescent staining to visualize its distribution. In control cells (left image)GPX4 staining was smooth and continuous. In contrast, in ADORA2B knockdown cells (right image) it appeared speckled and aggregated.

Question 38

右のグラフに示されているように、 グルタチオン合成とGPX4機能に不可欠なシステイン取り込みは、 著しく低下し、 フェロトーシス阻害剤を適用しても同様でした。

Answer 38

As shown in the right graph, / Cystine uptake— which is essential for glutathione synthesis and GPX4 function— was significantly impaired, / even when ferroptosis inhibitors were applied.

Question 39

これらの知見は示唆しています ADORA2Bの欠損がシスチン取り込みを阻害し、 その結果、GPX4の局在異常や脂質過酸化の増加につながることを。

Answer 39

These findings indicate that ADORA2B deficiency impairs cystine uptake, leading to GPX4 mislocalization and increased lipid peroxidation.

Question 40

総合すると、 これらの結果はADORA2Bの欠損が 栄養膜細胞（トロホブラスト）をフェロプトーシスに対して脆弱にし、 低酸素かつ鉄に富む環境下で抗酸化防御を損なうことを示しています。

Answer 40

Together, / these results demonstrate that ADORA2B deficiency / makes trophoblasts vulnerable to ferroptosis under hypoxic, iron-rich conditions by impairing antioxidant defences /

Question 41

具体的には、我々が観察したのは、 GPX4の局在の断片化、シスチン取り込みの低下、膜特異的な脂質過酸化の増加です。

Answer 41

Specifically, / we observed fragmented GPX4 localisation, / impaired cystine uptake, / and increased membrane-specific lipid peroxidation.

Question 42

鉄過剰状態では、 これらの脆弱性がフェロトーシスによる細胞死を著しく促進し、 胎盤細胞の生存を脅かす可能性があります。

Answer 42

Under conditions of iron overload, / these vulnerabilities significantly enhance ferroptotic cell death, potentially compromising placental cell viability.

Question 43

しかし、このプロセスが実際の生体内、 特に妊娠初期にどのように起こるのでしょうか？

Answer 43

But how might this process occur in vivo, / especially in early pregnancy?

Question 44

我々は、エピジェネティックな脆弱性と局所的な鉄過剰を伴うモデルを提唱します。 妊娠初期、胎盤は低酸素環境下で発達します。 局所的な出血や母体の鉄蓄積が過剰な鉄を放出し、高リスクな環境を作り出します。

Answer 44

We propose a model / involving epigenetic vulnerability and local iron overload. In early pregnancy, / the placenta develops under hypoxic conditions. Local haemorrhage or maternal iron accumulation / may release excess iron, / creating a high-risk environment.

Question 45

ADORA2Bがエピジェネティックに抑制されていると、 栄養膜細胞は酸化ストレスに対して極めて脆弱になります。 その状態で過剰な鉄が流入すると、フェロトーシスが誘導され、 胎盤の発達が障害され、妊娠高血圧腎症を引き起こす可能性があります。

Answer 45

If ADORA2B is epigenetically silenced, / trophoblasts become highly vulnerable to oxidative stress. Excess iron can trigger ferroptosis, / impairing placental development / and potentially leading to preeclampsia.

Question 46

つまり、エピジェネティックな脆弱性と局所的な鉄過剰が同時に存在する必要があり、 鉄の制御が重要な環境因子であることが示されます。

Answer 46

Thus, / epigenetic vulnerability and local iron overload must coincide, highlighting iron regulation / as a key environmental factor.

Question 47

結論として、 ADORA2Bノックダウンされた栄養膜細胞はフェロプトーシスに対して非常に感受性が高くなります CoCl₂で模倣した鉄過剰状態と低酸素条件下において。

Answer 47

In conclusion, / ADORA2B knockdown trophoblasts become highly sensitive to ferroptosis / under iron overload and hypoxia simulated by CoCl₂

Question 48

これは「2段階ヒットモデル」を支持しています： （低酸素環境下） ADORA2Bが失われることで細胞は脆弱性を持ち、 過剰な鉄によってフェロトーシスと胎盤障害が誘発されるのです。

Answer 48

This supports a two-hit model : Loss of ADORA2B creates a cellular vulnerability in a hypoxic environment, and excess iron triggers ferroptosis and placental damage.

Question 49

ADORA2Bの発現レベルや母体の鉄状態をモニタリングすることで、 フェロトーシス関連の胎盤機能障害のリスクがある妊娠を特定できる可能性があります。

Answer 49

Monitoring ADORA2B expression and maternal iron status may help identify pregnancies at risk for ferroptosis-related placental dysfunction. /

Question 50

将来的な戦略としては、 適切な鉄のコントロール、抗酸化剤の活用、 そしてADORA2Bの機能を調節する方法などが挙げられます。

Answer 50

Future strategies may include balanced iron regulation, / antioxidants, / and modulating ADORA2B function.

Question 51

Q1. Why did you focus on ADORA2B? Q1（日本語）ADORA2Bに注目した理由は？

Answer 51

A1. / ADORA2B is known to be upregulated under hypoxic conditions in the placenta and has been implicated in antioxidant defence. / In our prospective cohort, / its promoter was found to be hypermethylated in preeclamptic samples, / prompting us to investigate its function. / A1（日本語）ADORA2Bは胎盤の低酸素環境で誘導され、抗酸化防御に関与する可能性が示唆されています。前向きコホートの解析でも、PE群でプロモーターの高メチル化が見られたため、機能的意義を検討しました。

Question 52

Q2. Why did you focus on ferroptosis? Q2（日本語）フェロトーシスに着目した理由は？

Answer 52

A2. / The placenta is vulnerable to oxidative stress, / and ferroptosis is a form of iron-dependent cell death driven by lipid peroxidation. / Given the role of GPX4 and glutathione in placental health, / we hypothesised that ferroptosis may be involved in trophoblast dysfunction. / A2（日本語）胎盤は酸化ストレスにさらされやすく、フェロトーシスは脂質酸化を引き金とする鉄依存性細胞死の一形態です。GPX4やグルタチオンの役割を踏まえ、フェロトーシスが胎盤機能障害に関与する可能性を検討しました。

Question 53

Q3. What does “iron overload” mean in this study? Q3（日本語）本研究でいう「鉄過剰」とは具体的に？

Answer 53

A3. / In our model, / iron overload was induced using ferric ammonium citrate (FAC) at concentrations above 800 µM. / Clinically, / this may correspond to local iron accumulation from bleeding or hemolysis. / A3（日本語）本研究では800µM以上のFACで鉄過剰環境を再現しています。臨床的には、局所の出血や溶血による鉄蓄積などが該当します。

Question 54

Q4. Are ferroptosis inhibitors like Lip-1 applicable to humans? Q4（日本語）Lip-1などのフェロトーシス阻害剤は臨床応用可能ですか？

Answer 54

A4. / Currently, / they are experimental compounds, / but ferroptosis inhibitors are being actively studied as potential therapeutics in various diseases. / They may eventually be considered for placental protection. / A4（日本語）現時点では研究段階ですが、フェロトーシス阻害剤はさまざまな疾患の治療標的として注目されており、将来的に胎盤保護への応用も期待されます。

Question 55

Q5. How can ADORA2B be measured in pregnancy? Q5（日本語）ADORA2Bはどのように測定しますか？

Answer 55

A5. / In our previous study, / promoter hypermethylation of ADORA2B was detectable in cell-free DNA from maternal plasma, / suggesting its potential as a non-invasive biomarker. / A5（日本語）本研究では、ADORA2Bのプロモーター高メチル化が母体血漿中のcfDNAでも検出され、非侵襲的バイオマーカーとしての可能性が示唆されました。

Question 56

Q6. What is the clinical relevance of your findings? Q6（日本語）今回の結果の臨床的意義は？

Answer 56

A6. / Monitoring ADORA2B expression and maternal iron status may help stratify pregnancies at risk for ferroptosis-related placental dysfunction, / possibly contributing to early prediction or prevention of preeclampsia. / A6（日本語）ADORA2Bの発現や母体の鉄状態をモニタリングすることで、フェロトーシス関連の胎盤機能障害リスクの層別化が可能になり、妊娠高血圧症候群の早期予測や予防につながる可能性があります。

Question 57

Q7. Isn’t the FAC concentration (800 µM) in your model too high to be physiologically relevant? Q7（日本語）800µMのFACは生理的に高すぎるのでは？

Answer 57

A7. / That’s a valid concern. / While 800 µM is supra-physiological, / it was chosen to model extreme local iron exposure—such as that caused by microbleeds or iron-rich debris in the intervillous space. / The goal was to test susceptibility under stress, / rather than reproduce exact physiological levels. / A7（日本語）ご指摘の通り800µMは生理的濃度を超えていますが、局所的な出血や鉄沈着などの極端な条件を模擬する目的で設定しました。正確な濃度再現ではなく、感受性の検証が主目的です。

Question 58

Q8. Could the observed effects be due to general toxicity from high iron, rather than ferroptosis? Q8（日本語）フェロトーシスではなく、単なる鉄毒性では？

Answer 58

A8. / We addressed that by using ferroptosis inhibitors like Lip-1 and Fer-1. / These agents partially restored viability and reduced lipid oxidation and LDH release. / These effects are consistent with ferroptosis-specific mechanisms, / rather than nonspecific toxicity. / A8（日本語）Lip-1やFer-1などのフェロトーシス阻害剤で部分的に生存率が回復し、脂質酸化やLDH放出も抑制されたことから、非特異的毒性よりもフェロトーシス機序であると考えています。

Question 59

Q9. Is ADORA2B suppression a cause or a consequence of oxidative stress? Q9（日本語）ADORA2Bの抑制は酸化ストレスの原因ですか？それとも結果？

Answer 59

A9. / That remains to be clarified. / However, / promoter hypermethylation of ADORA2B was detected early in pregnancy in our clinical samples, / suggesting that it may precede oxidative stress and act as a priming event. / A9（日本語）現時点では断定できませんが、ADORA2Bの高メチル化は妊娠初期から検出されており、酸化ストレスに先行して脆弱性を形成している可能性があります。

Question 60

Q8. Could the observed effects be due to general toxicity from high iron, rather than ferroptosis? Q8（日本語）フェロトーシスではなく、単なる鉄毒性では？

Answer 60

A8. / We addressed that by using ferroptosis inhibitors like Lip-1 and Fer-1. / These agents partially restored viability and reduced lipid oxidation and LDH release. / These effects are consistent with ferroptosis-specific mechanisms, / rather than nonspecific toxicity. / A8（日本語）Lip-1やFer-1などのフェロトーシス阻害剤で部分的に生存率が回復し、脂質酸化やLDH放出も抑制されたことから、非特異的毒性よりもフェロトーシス機序であると考えています。

Question 61

Q10. What are the limitations of your in vitro model? Q10（日本語）このin vitroモデルの限界は？

Answer 61

A10. / Our model is based on a trophoblast cell line and does not fully recapitulate the complex in vivo placental environment, / including maternal-fetal interactions and vascular structures. / Further validation in animal models or organoids will be important. / A10（日本語）このモデルは栄養膜細胞株に基づいており、母体-胎児間相互作用や血管構造など、胎盤のin vivo環境すべてを再現しているわけではありません。動物モデルやオルガノイドを用いたさらなる検証が必要です。

Question 62

Q11. Is epigenetic silencing of ADORA2B reversible? Q11（日本語）ADORA2Bのエピジェネティックな抑制は可逆的ですか？

Answer 62

A11. / In principle, / DNA methylation is reversible, / and certain demethylating agents or histone modifications could potentially restore ADORA2B expression. / However, / safety and specificity must be carefully evaluated before clinical application. / A11（日本語）DNAメチル化は基本的に可逆性があり、脱メチル化薬やヒストン修飾によってADORA2Bの発現が回復する可能性はあります。ただし、臨床応用には安全性や特異性の十分な検討が必要です。

Question 63

Q12. How could this be validated in human pregnancy? Q12（日本語）この知見はヒト妊娠でどうやって検証できますか？

Answer 63

A12. / One approach is to use cfDNA methylation profiling from maternal plasma to correlate ADORA2B methylation with pregnancy outcomes. / Placental explant or organoid models may also be used to simulate ferroptotic stress ex vivo. / A12（日本語）母体血漿由来のcfDNAメチル化解析を用いて、ADORA2Bメチル化と妊娠予後の関連を調べることがひとつの手段です。また、胎盤組織やオルガノイドモデルでフェロトーシス誘導を模擬することも可能です。

Question 64

Q13. Can you prove that ADORA2B suppression causes ferroptosis rather than just being correlated? Q13（日本語）ADORA2Bの抑制がフェロトーシスの「原因」だと証明できますか？

Answer 64

A13. Our data show that ADORA2B knockdown leads to GPX4 fragmentation, impaired cystine uptake, and lipid peroxidation—all hallmarks of ferroptosis. Rescue with Lip-1 supports a causal role, though further mechanistic studies (e.g., ADORA2B overexpression) would strengthen this claim. A13（日本語）ADORA2BノックダウンによってGPX4の断片化、システイン取り込み障害、脂質酸化が生じ、いずれもフェロトーシスの特徴です。Lip-1による救済効果も原因性を支持しますが、今後はADORA2Bの過剰発現などによる検証も必要です。

Question 65

Q14. Could other antioxidant pathways compensate for ADORA2B loss? Q14（日本語）ADORA2Bが失われても、他の抗酸化経路が代償するのでは？

Answer 65

A14. / That’s possible. / However, / in our model, / GPX4 mislocalization and cystine uptake failure were not rescued by ferroptosis inhibitors, / indicating that compensatory pathways were insufficient under stress. / Broader antioxidant profiling may reveal additional factors. / A14（日本語）その可能性はあります。ただ本研究モデルでは、GPX4の局在異常やシステイン取り込み障害がLip-1でも改善せず、代償的な抗酸化経路では十分に補えない状況でした。今後はより広範な抗酸化解析も検討する必要があります。

Question 66

Q15. What are the barriers to applying these findings therapeutically? Q15（日本語）この知見を治療応用する上での課題は？

Answer 66

A15. / Key challenges include tissue specificity, / safety of ferroptosis inhibitors, / and reliable early biomarkers. / Clinical translation would require validating ADORA2B-related markers in large pregnancy cohorts and optimizing intervention timing. / A15（日本語）主な課題は、組織特異性、フェロトーシス阻害剤の安全性、早期バイオマーカーの信頼性などです。臨床応用には、ADORA2B関連指標の大規模妊婦コホートでの検証や、介入のタイミング最適化が必要です。

Question 67

Q16. How generalizable is your model across gestational stages or populations? Q16（日本語）今回のモデルは妊娠週数や集団に一般化できますか？

Answer 67

A16. / Our current model is based on early gestational trophoblasts and may not fully apply to later stages or all populations. / Future work should examine temporal expression of ADORA2B and validate findings in diverse clinical cohorts. / A16（日本語）本研究は妊娠初期の栄養膜細胞をモデルとしており、後期や他集団にそのまま一般化できるとは限りません。今後はADORA2Bの妊娠週数ごとの発現変化や、多様な臨床集団での検証が必要です。

Question 68

Q17. How does the timing of ADORA2B suppression relate to the onset of placental dysfunction? Q17（日本語）ADORA2B抑制のタイミングと胎盤障害の発症にはどんな関係がありますか？

Answer 68

A17. / In our clinical samples, / ADORA2B hypermethylation was detectable in early pregnancy, / suggesting that suppression may precede dysfunction. / Longitudinal studies will be needed to clarify the temporal sequence. / A17（日本語）ADORA2Bの高メチル化は妊娠初期から検出されており、発症に先行している可能性があります。正確な時間的関係を明らかにするには縦断的研究が必要です。

Question 69

Q18. Are there plans to validate these findings in clinical specimens? Q18（日本語）臨床検体での検証は予定されていますか？

Answer 69

A18. / Yes. / We are currently planning to analyze placental and maternal plasma samples from ongoing pregnancy cohorts to validate ADORA2B methylation and ferroptosis markers. / A18（日本語）はい。現在進行中の妊婦コホートから得られる胎盤および母体血漿サンプルを用いて、ADORA2Bメチル化およびフェロトーシスマーカーの検証を行う予定です。