Electroforesis y tipos de PCR Flashcards
Electroforesis
- separa moléculas dependiendo de su peso molecular
- campo eléctrico
- duración 30 min
Elementos necesarios para una electroforesis
- cámara de electroforesis
- gel de agarosa
- marcador de peso molecular
- transiluminador violeta
¿Qué es el marcador de peso molecular?
- mezcla de moléculas de ADN o proteínas
- permiten comparar el tamaño de moléculas (ac. nucleicos/proteínas) en las muestras de electroforesis
PCR estándar/punto final
- cualitativa
- amplificación de ADN
- 2 partidores (primers)
PCR múltiplex
- busca diferentes 2 o más genes en una sola muestra
- cualitativa
- varios partidores (primers)
Tipo de PCR (SSO)
Secuence specific oligo
- Compatibilidad en transplantes
- Se une a secuencias específicas de polinucleótidos post-amplificación → fluoróforo billará
- busca polimorfismos en HLAI y HLAII
Tipo de PCR (SSP)
- compatibilidad en transplantes
- cebador específico, solo se hará durante la amplificación si se encuentra secuencia complementaria
- detecta polimorfismos
PCR (RFLP)
Restriction fragment length polymorphisms
- detectan polimorfismos
- se usan enzimas de restriccion (✅ polimorfismo → enzima ❌ corta)
- Al hacer PCR el fragmento no se amplifica
- Cualitativa
PCR (TR)
Reverse-transcriptase
Detección de un virus
- Se sintetiza cADN a partir de ARN → luego se hace la PCR
- cADN será una copia del ARN → ¿de quien? → 🦠
transcrito primario
PCR (RT)
Real time
- Usa tinciones/fluoróforos
- Puede ser estándar o multiplex
- Cuantitativa
Más sensible (se usaba en COVID)
Tipos de colorantes en el análisis de ácidos nucleicos
- específicos
- no específicos (syber green)
De dónde a dónde van los primers reverse y forward
forward: 5’ 3’
reverse: 3’ 5’
¿Qué es una sonda?
Secuencia de nucleotidos del gen de interés que tiene un fluoróforo
- ¿Con base a qué se prepara la concentración del gel de agarosa?
- ¿Cómo serán los poros del gel en relación a la concentración?
- Tamaño del á. nucléico por analizar
- Inversamente proporcional
→ + concentada = poros pequeños
→ - concentrada = poros grandes
¿Por qué se utilizan las mismas enzimas de restricción para comprar fragmentos del DNA?
- Enzima es específica
- Si ambas muestras tienen la misma secuencia → enzimas cortan en el mismo sitio → se amplifica el mismo sitio
Puede haber ligeros cambios pq no son clones
¿Qué pasará con los fragmentos más largos del DNA al momento de usar electroforesis?
- Larger = sLowest → más arriba (-)
- Shorter = faSter → más abajo (+)
en QPCR
Si la curva exponencial incia antes es indicativo de…
Mayor carga → había más material genético y se necesito menos tiempo para inicar el ciclo
