Manipulación de genes Flashcards
Técnicas utilizadas para modificar el genoma humano
- DNA recombinante
- Microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertlizados
- Modificaciones genéticas en células madre embriónicas
- CRISPR - Cas 9
¿Qué es la microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados?
- El gen es modificado mediante un plásmido o CRISP-Cas9
- Se inyecta gen de interés en un huevo fertilizado de un animal (debe estar en etapa de pronúcleo)
- Gen insertado antes de la primera división
Características de las modificaciones genéticas en células madre embriónicas
- Se obtienen del blastocisto
- Manipulación via recombinacion homóloga
- Reintroducidas en blastocitos receptores
Para asegurar expresión del gen:
- Combinar 2 quimeras → mutación 100% (animal transgénica)
Se mantienen como cx. madres mediante factores inhibitorios
¿Qué se hace en la transferencia de núcleo a una célula somática (clonación)?
- Se obtien núcleo de una célula somática
- Extracción del citoplasma de un óvulo
- Fusión
- Implantación
- Clonación del organismo del que fue extraido el núcleo
La células deben estar en etapa G0/G1
¿Qué es CRISPR?
Clustered regularly-interspaced short palindromic repeats
Repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas (entre ellas está bacteriófago)
¿Por qué agrupadas? Están en un solo lugar del cromosoma
Palindrómicas → se leen igual en sentido 5’-3’ que 3’-5’
¿Qué es CAS?
Endonucleasa asociada a la CRISPR
Aplicaciones de CRISPR-Cas
Permite diseño de terapias genicas:
- Distrofia muscular de Duchenne
- Atrofia de músculos proximales
- Gen Dmd (Proteína distrofina)
CRISPR Cas9
- Bacteriófago inyecta su ADN
- Complejo Cas1-Cas2 corta protoespaciador (identifica PAM en bacteriófago)
- Protoespaciador se añade a la matriz CRISPR (DNA de la bacteria) y se convierte en un espaciador (extremo 5’)
- Polimerasa transcribe región CRISPR → mRNA se une a Cas9
- Se corta DNA y luego hay recombinación no homóloga
PAM solo está presente en DNA bacteriófago
Fago-CRISPR-Cas9
Bacteriófago
Virus que infecta bacteria
Matriz CRISPR
Matriz de espaciadores repetidos
Protoespaciador
Segmento del DNA del bacteriófago
Cas9
Proteínas asociadas a CRISPR
- Cas9 separa doble hebra
- Si el SG (single guide) RNA es complementario rio arriba del PAM → se corta el DNA
Función de CRISPR-Cas9
- Silenciar, potencoar
- Cortar, desaminar, marcar
- Insertar nuevo gen
