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Enzimas de Restricción Flashcards

(46 cards)

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1
Q

Las enzimas de restricción aisladas a partir de E. coli tenían actividad

A

metil transferasa y nucleasa a nivel del enlacefsfodiéster del ADN no metilado

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2
Q

Descubridores de las enzimas de restricción en E. coli en 1960

A

Stewart y Werner

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3
Q

La enzima de restricción aislada de Haemophilus influenzae era específicamente

A

endonucleasa de restricción

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4
Q

Endonucleasa de restricción aislada de Haemophilus influenzae

A

HindI

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5
Q

Descubridores de HindI

A

Nathans y Hamilton

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6
Q

En qué modelo biológico se observó la actividad de clivaje de endonucleasa de restricción de H. influenzae?

A

Virus ADN SV40

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7
Q

La restricción implica:

A. desalinear
B.destruir
C.quitar
D. clivar

A

D

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8
Q

Las endonucleasas aisladas clivan en dirección ……………………. a nivel del ……………..

A

5’ a 3’ ; enlace fosfodiéster

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9
Q

La reacción química clave del clivaje de ADN se denomina …………………. y se requiere …………………

A

hidrólisis; Mg2+

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10
Q

Molécula donadora de grupos metilo

A

adenosilmetionina (SAM)

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11
Q

Metiltransferasas

A

Transfieren grupos metilo al ADN por transmetilación

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12
Q

Responda V o F según eventos involucrados en el sistema de restricción - modificación:

A. Su génesis no está relacionada a la defensa contra bacteriófagos ( )
B. Si el sitio de restricción es metilado, la endonucleasa lo cliva ( )
C.Las metiltransferasas añaden grupos metilo a los fragmentos de restricción producto del clivaje de las endonucleasas ( )
D. El ADN no metilado bacteriano es lábil al clivaje inespecífico de endonucleasas ()

A

A. Su génesis no está relacionada a la defensa contra bacteriófagos (F)
B. Si el sitio de restricción es metilado, la endonucleasa lo cliva (F)
C.Las metiltransferasas añaden grupos metilo a los fragmentos de restricción producto del clivaje de las endonucleasas ( v)
D. El ADN no metilado bacteriano es lábil al clivaje inespecífico de endonucleasas (F)

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13
Q

Lea el siguiente enunciado y responda V o F según corresponda:

Bernal (2025) identificó una nueva endonucleasa aislada a partir de H. pylori cepa RPe_43 aisladas de Periplaneta americana. El conoce de antemano que en la literatura se han reportado 3 endonucleasas aisladas de H pylori. Inmediatamente desea reportar sus hallazgos conforme a la nomeclatura de las enzimas de restricción. AL final manda su manuscrito reportando a la endonucleasa como HpyRIV.

A. El carácter para género debe escribirse en mayúscula ()
B. Bernal (2025) puede acuñar a la endonucleasa como HpylRIV ()
C. La alternativa B contienen un error de nomenclatura a nivel del orden de la enzima aislada
D. El nombre correcto sería HpyIV
E. D te miente, es HpyRIV
F. Bernal (2025) no sabe reportar su endonucleasa aislada.

A

A. V
B. F
C. F
D. V
E. F
F. V (si somos)

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14
Q

Identifica al impostor de endonucleasas de extremo cohesivo

  • EcoRI
  • HindIII
  • NotI
  • SmaI
  • HgaI
A

SmaI

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15
Q

Actividad estrella

A

Actividad endonucleasa fuera del sitio de restricción y de comportamiento aleatorio.

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16
Q

Cantidad de enzima necesaria para digerir 1 ug de ADN lambda en un 50 uL bajo t = 1 hora

A

Unidad enzimática

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17
Q

Factores que inducen actividad estrella de una enzima

A
  • Bajas concentraciones de sales de buffer o sustitución de Mg2+ por otro catión divalente.
  • pH diferente al requerido para actividad óptima
  • baja fuerza iónica
  • Alta concentración de enzima de restricción
  • Presencia de solventes orgánicos en la reacción
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18
Q

Qué son los Isoesquizómeros?

A. Enzimas que reconocen parcial o totalmente el mismo sitio de restricción y clivan en la misma posición
B. Enzimas de restricción cuya actividad estrella es similar
C. Enzimas características de un cuadro de esquizofrenia.
D. Enzimas cuyo sitios de restricción se diferencian en menos de tres nucleótidos.

A

A. Enzimas que reconocen parcial o totalmente el mismo sitio de restricción y clivan en la misma posición

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19
Q

Laas enzimas de restricción más usadas en la ingeniería genética son del tipo:

20
Q

Las enzimas de Tipo II requieren no requieren de:

20
Q

Las enzimas de restricción de tipo III pueden reconocer la secuencia de restricción y clivar

Study These Flashcards
A

25 a 27 pb corriente abajo

21
Q

Tipos de enzimas con actividad nucleasa y metilasa

Study These Flashcards
A

Tipo I, Tipo III

22
Q

Secuencia de restricicón de TaqI:

A. T^CGT
B. T^CGA
C. TC^GA
D.TCG^A

23
Q

Enzima de restricción orden I aislada de Providencia stuarti

23
EL sitio de clivaje de las enzimas de restricción tipo I se da alrededor de
+1000 bp corriente arriba o abajo
24
A nivel estructural, que tipos de enzimas de restricción son bifuncionales teniendo 2 subunidades
Enzimas de restricción tipo III
25
A nivel estructural, que tipos de enzimas de restricción son bifuncionales teniendo 3 subunidades
Tipo I
26
Secuencia diana de SmaI
CCC^GGG
27
A nivel estructural, que tipos de enzimas de restricción presentan actividad endonucleasa y metilasa por separado?
Enzimas tipo II
28
Qué tipos de enzimas de restricción requieren de ATP para llevar a cabo la restricción?
Tipo I, Tipo III
29
¿Es lógico pensar hacer mapas de restricción y RFLP conenzimas derestricción de tipo I o III
No, recordar que la acción de clivaje de estas enzimas no se da dentro de la secuencia diana
30
Aplicación de las enzimas de restricción a nivel de la evaluación de tamaño molecular por electroforesis
- Fragmentación de ADN para separación electroforética - Polimorfismo de fragmentos de restricción y diagnóstico de enfermedades - Corroboración de productos amplificados por PCR
31
Mapa de información física que permite ubicar los sitios específicos de corte de las enzimas en una secuencia de ADN
Mapa de restricción
31
El análisis de interpretación de los fragmentos originados por las enzimas implica:
- Enzimas de restricción que participaron en el clivaje - Orden de clivaje de las enzimas de restricción
32
Determina el logaritmo del tamaño molecular vs la distancia migrada de los fragmentos generados por clivaje selectivo
Curva de calibración
33
Base de datos de enzimas de restricción
REBASE
34
NEBCUTTER
Simulador de ADN que modela el patrón electroforético usando como input .fasta y parámetros las enzimas de restricción a usar
35
Secuencia de reconocimiento de *Eco*RI: - G^ATCC - G^AATTC - G^CCGG - G^TTAAC
G^AATTC
36
Tipo de extremos gerados por *Eco*RI
cohesivo
36
La enzima ADN ligasa más usada comercialmente fue aislada de:
virus fago T4
37
Otra fuente frecuente de ADN ligasas útiles para ingeniería genética son las
eubacterias
38
Respecto a las ADN ligasas: a. Todas requieren de ATPpara reestablecer el enlace fosfodiéster b. Las ADN ligasas aisladas a partir del fagos (como T4) requieren ATP c. Las ADN ligasas aisladas a partir de eubacterias no necesitan NAD+
F V F
39
La DNA ligasa de E. coli solo liga:
extremos cohesivos
40
DNA ligasa que no liga RNA a DNA
DNAsa de E. coli
41
Respecto a las fosfatasas: A. La fosfatasa alcalina del intestino de ternera (CIP) es termoestable y se denatura a 75°C por 10 minutos B. La fosfatasa alcalina de bacteria es termoestable y tiene 10-20 veces menos actividad que CIP C. CIP a diferencia de BAP no necesita Zn++
F, es termolabil a 70° por 10 minutos V, F,ambas necesitan Zn++ como cofactor
42
¿Cuál es la función de la fosfatasa alcalina?
impedir la recirculación de vectores vacíos (sin insertos) para impedir la transformación de E. coli sin insertos

Ingeniería Genética (4 decks)

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