LCMS Flashcards
Vad är PEth?
- Markör för alkoholkonsumtion
- Helt etanolspefik metabolit
- Ger information om alkoholkonsumtionen de senaste 1-3 veckorna. Låg, hög, måttlig?
Vad finns de för biokemiska tester vad gäller alkoholkonsumption ?
Vad står PEth för? När bildas PEth?
PEth= Fosfatidyletanol
Fosfatidylkolin metaboliseras till fosfatidsyra via fosfolipas D. I närvaro av etanol bildas PEth. 48 isomerer-fettsyrorna varierar. PEth 16:0/18:1 vanligaste PEth-formen och den som mäts.
Analysmetod för PEth?
Metoden måste ha hög specifitet.
LC-MS/MS
Kromatografisk separation
Masspektrometrisk separation
-> Separation från andra fosfolipidklasser och övriga PEth-former.
Fysikaliska och kemiska egenskaper hos PEth?
- Finns i erytrocyternas celmembran
- Fet (=opolär, lipofil el. hydrofob) substans
- Summaformel: C39H75O8P
- Molekylvikt: 703.0 dalton
- Monoisotopisk massa 702.5 Dalton
- Molekyljon: [M-H]- 701.5 Dalton
Val av metod baseras på de fysiklaiska/kemiska egenskaperna.
Vilken metod används:
- Finns i erytrocyternas cellmembran
- Fet
- [M-H]- 701.5 Dalton
Finns i erytrocyternas cellmembran
Analys i helblod (EDTA-rör) som fryses innan analys)
Fet
Extraktion med metanol/aceton
[M-H]- 701.5 Dalton
Analys av joner med m/z 701.5
Vad menas med intern standard? Berätta om detta.
Detta används för att korrigera:
- Upparbetningsfel: Mätfel pga felaktigt uppmätta volymer (Ex. injektionsvolym)
- Analysfel: Störning av analytens förmåga att ge signal i detektorn
Internstandarden ska vara så lik analyten som möjligt.
Analyt med stabil isotopinmärkning är att föredra 13^C, 2^H(=deuterium, D), 18^N, O^18
Vi använder PEth 16:0/18:1-D5-
- Samma mängd IS ska tillsättas alla prover.
- Om ingen interferens finns så ska signalen för IS vara samma i alla prover.
- Om interferens finns så ska IS påverkas i lika stor utsträckning som analyten
- Om signalen för analyt halveras så ska signalen för IS halveras
- Om signalen för analyt dubblas så ska signalen för IS dubblas
Vid uträkning av resultat används kvoten mellan signal analyt/ signal IS
I vilket utav fallen har vi använt kalibreringskurva med IS?
Varför använder vi oss av driftskontroller?
För att kontrollera att kalibreringen stämmer. Analyseras både före och efter patientproven.
Hur fungerar kromotografi?
Kromotografi separerar provets komponenter i en analytisk kolonn.
Vad görs vid masspektrofotometri?
Filtrerar ut och analyserar substanser efter molvikten
Hur skapas ett kromatogram? Hur många kromotogram skapas för varje prov?
Upprepade märningar i masspektrofotometern skapar kromatogram. Varje prov genererar två kromotogram (analyts & IS)
Vad visar kromatogrammet?
Hur tolkar du dessa provresultat?
