Seperationstekniker

Question 1

Varför behövs separation?

Answer 1

• För att kunna studera ett ämnes egenskaper och/eller struktur
• För att kunna bestämma halten/koncentrationen av ett ämne
• Ex: vätskekromotografi plus UV
• Ex: jonbyteskromatografi plus UV

Question 2

Vad finns de för utmaningar vad gäller separation?

Answer 2

Olika matriser har olika egenskaper.

Exempel:

• Viskositet
• salter
• pH
• Lipider
• Proteiner
• Blodceller

Question 3

Analytens koncentration kan vara en utmaning.

Hur ser utmaningen ut vid:

• Coulometrisk enzymatisk
• Immunobaserad, UV
• Masspektrofotometri
  *

Answer 3

Coulometrisk enzymatisk : Litet behov av seåraration innan detektion

Immunobaserad, UV : Separation av detektion i vissa fall

Masspektrofotometri : mycket stort behov av separation innan detektion

Question 4

Exempel på separationsmetoder

Answer 4

Centrifugering och kromotografi

Question 5

Varför används centrifugering?

Answer 5

När en partikel är så liten att gravitationen inte räcker till för att sedimentera, dvs tar för lång tid eller att diffusionskrafter är starkare, så måste centrifugalkraft appliceras.

Question 6

Vad är RCF och RPM?

Answer 6

RCF= centrifugalkraft angiven i antal g

RPM=rotation per minut, hastighet

Question 7

Beskriv kromotografi?

Answer 7

Question 8

Hur kan du klassificera olika kromatografiska tekniker?

Answer 8

Question 9

Hur kan du klassificera kromatografiska tekniker utifrån vätskekromotografi?

Answer 9

Question 10

Beskriv kromatogrammet

Answer 10

Question 11

Vad är retensionsfaktor och selektivitetsfaktor

Answer 11

• Tiden som analyt tillbringar på stationär fas beskrivs med retentionsfaktor
• Skillnaden mellan två analyter beskrivs med selektivitesfaktor helst >1,5

Question 12

Vad är teoretiska bottnar N och Bottenhöjd ?

Answer 12

• För att beskriva kolonners effektivitet så används begreppet Teoretiska Bottnar N
• För att jämföra olika kolonners effektivitet så används begreppet Bottenhöjd (H)

Question 13

Berätta om Van Deemter-ekvationen

Answer 13

Van Deemter-ekevationen relaterar Bottenhöjden för en analytisk kolonn till olika flödes och kinetiska parametrar.

Question 14

Sätt ut delarna Vätskekromatograf

Answer 14

Question 15

kommer hydrofoba ämnen ut tidigt eller sent från reversed fasen?

Answer 15

Question 16

Berätta om gelfiltrering

Answer 16

• Vanlig för att rena och analysera proteiner
• Stationärfasen består av inerta/stabila porösa partiklar som är packade i en kolonn
• Separerar molekyler utifrån storlek

molekyler som är små får en längre väg att vandra då de taromvägen in i de porer som finns i gelpartiklarna

Question 17

Beskriv jonbyteskromotografi

Answer 17

• Separerar molekyler utifrån laddning
• Katjonbytare binder positivt laddade molekyler
• Anjonbytare binder negativt laddade molekyler

Nettoladdningen hos proteinet är avgörande för bindningen till en jonbytare.

Proteinerna elueras ut ur kolonnen med ökad jonstryka(saltkoncentration), eller ibland också ökat pH

Question 18

Vid affinitetskromatografi sker eluering med:

Answer 18

• Ändrat pH
• Ändrad mobilfassammansättning
• Kompetation med ligand
• Kompetation med receptor

Question 19

Hur är tunnskiktskromotografi uppbyggt?

Answer 19

Stationärfas på en platta och mobilfas i botten av en behållare

Question 20

Hur fungerar kapillärelektrofores?

Answer 20

Analyter i form av joner dras igenom kapillären mga ett elektriskt fält

Question 21

När är de bra att använda gaskromotografi?

Answer 21

Om ämnena man vill analysera är lättflyktiga så kan man med fördel använda gaskromatografi.

Med gaskromatografi kan man få väldigt bra separation.