ANTIGENIO
- molecula q se liga a uma estrutura proteica especifica (anticorpo) ou a recetor especifico
classificacao (origem)
- autoantigenios
-antigenios do self; se houver resposta contra estes estamos perante doenca autoimune - aloantigenios
-de outros indiv da mm especie; normal haver resposta - xenoantigenios
-de indiv de outras especies - superantigenios
-classe de antígenos capaz de causar ativação inespecífica de um grande número de células T que se multiplicam e liberam grandes quantidades de citocinas
IMUNOGENIO
- antig que ativa cels imunes e gera resposta imunitaria contra ele
HAPTENO
- pequena molecula organica que por si so nao e imunogenica mas e capaz de se ligar ao anticorpo
- medicamente (pe)
- casos como alergia a medicamentos, pequenas moleculas p serem reconhecidas p TCR e BCR, ligam se a molecula do proprio organismo, alterando-a (haptenizacao) (medicamentos em pessoas alergicas juntam se a albumina no soro e passam a ser reconhecidos)
- O conceito de hapteno se estende a toda molécula natural (lipídeos, nucleotídeos, etc…) não imunogênica por si pr própria mas podendo manifestar sua especificidade quando conjugado.
EPITOPO
- determinante antigénico (porcao + pequena do antigenio capaz de se ligar ao anticorpo)
- valencia do antigenio: total (n total de epitopos) e funcional (n epitopos disponiveis, q n estao ocultos)
- podemos ter anticorpos p diferentes epitopos do mm antigenio, sendo mais ou menos eficazes
PARATOPO
regiao do Ig q se liga ao antigenio
ANTICORPO
- imunoglobulina prod pelos plasmocitos com especificidade p antigenios
- 2 cadeias pesadas (gama, alfa, miu, epsilon e delta) (3/4 regioes constantes e 1 variavel)
- 2 cadeias leves (kapa ou lambda) (1 regiao variavel e 1 constante)
- ligadas por pontes de dissulfureto
- parte constante depende sobretudo da cadeia pesada e da funcao efetora e na variavel ocorre ligacao ao antigenio, dando especificidade ao anticorpo)
- em cada anticorpo, as cadeias leves sao iguais entre si e as pesada iguais entre si, ou seja, os dois paratopos sao iguais e ligam se a epitopos iguais
ptn
a) classes/isotipos
- 5 tipos cadeias pesadas, 5 tipos de imunoglobulinas
- GAMED
b) regiao da charneira
- regiao de flexibilidade
c) funcoes in vivos (5)
NEUTRALIZACAO
- anticorpo especifico liga se a molecula (patogenio) e previne que exerca a sua funcao
OPSONIZACAO
- fagocitose facilitada
- anticorpos ligam se a superf dos patogenios e os anticorpos sao reconhecidos pelos fagocitos
CITOLISE
- citotoxicidade celular dependente de anticorpos
- anticorpos “dizem” as cels citotoxicas quais as celulas q devem matar
ativacao do complemento
- fixa as moleculas do complemento ( q depois abrem poros na superf do patogenio)
desgranulacao dos mastocitos
- especifica dos IgE
- IgE recobre superf de cels como basofilos e mastocitos
- IgE mastocito/… se liga ao antigenio, provoca reacao de desgranulacao (Imp p destruir os parasitas pois estes sao mt grandes p serem fagocitados)
d) funcoes in vitro
- aglutinacao
- precipitacao
- ativacao do complemento
e) caracteristicas basicas e fundamentos dos ensaios com anticorpos
ligacao nao covalente ————————————
- ligacao reversivel p forcas fracas
- (util p casos como a tecnica competitiva e a inibicao da aglutinacao)
especificidade—————————————-
- conceito chave-ferradura (anticorpo e antig ligam se de forma especifica)
- especificidade depende regioes hipervariaveis mt dif entre os antic (ha 3 na cadeia leve e 3 na pesada)
- excecao: reacoes cruzadas, onde antic podem ligar a antigenios diferentes desde q epitopos sejam estruturalmente semelhantes (epitopo partilhado, com zona de ligacao identica, e epitopo semelhante, podendo ter este ultimo forca de ligacao logeiramente menor)
afinidade antig-antic——————————————
- maior quant melhor o encaixe (formam mais ligacoes nao covalentes e formam forca maior)
avidez————————————-
- forca total de ligacao de antigenio com varios epitopos a um anticorpo
- se num antigenio so temos um epitopo, forca de ligacao é afinidade
- quantas mais ligacoes, maior a avidez (pe, molecula de igM forma pentomeros, logo 10 bracos, 10 paratopos, tendo a capacidade de formar avizezes mt elevadas)
f) fatores que afetam in vitro a ligacao das reacoes antigenio-anticorpo
-afinidade
- avidez
- racio antig-anticorpo (proporcao correta, anticorpo com antigenio em cada braco, formando uma rede)
testes baseados em reacoes antig-anticorpo
- dependem formacao rede
- usados p detetar antig ou Ig
AGLUTINACAO
PRECIPITACAO
ELISA
RIA
IF
(…)
conceitos
pró zona (antes)
excesso anticorpo; menor formacao de rede
zona de equivalencia
ig e antig em proprocoes otimas (zona maxima de precpitacao ou aglutinacao)
(pelas freq, supostamente ambos estao totalmente saturados)
pos zona (depois)
excesso de antigenio; diminui formacao de rede
(formacao rede tanto em precipitacao como em aglutinacao)
AGLUTINACAO
- qualitativo (ou semi quant, ver em baixo)
- anticorpo (aglutinina) e o antigenio (aglutinogenio)
- antigenio insoluvel ou adsorvido a superf de cels
- antigenio com pelo menos dois epitopos
- formacao de rede com moleculas grandes (visivel a olho nu com auxilio de lentes de ampliacao)
- igM (melhor aglutinina; 5 monomeros, maior tamanho e capacidade de fixacao de antigenios); igG (pior)
- titulo: maior diluicao que teve aglutinacao (o numero é o inverso da ultima diluicao) ; na titulacao, mantemos constante Ag ou Ig e diluimos o outro (procura da zona ideal de formacao de rede)
- titulo transf teste em semiquantitativo : se a testar autoanticorpo, num doente aglutina ate 320 e noutro 10, o 320 tem muito mais anticorpo pq consegue formar rede mesmo estando muito mais diluido
- vanatagens
-rapido
-visualizacao facil
-sensivel
a) classificacao
DIRETA (sistemas abo e Rh)
- antigenio e anticorpo
- detecao de antigenios particulados desconhecidos com Ig conhecidos ou oposto
- *sistema ABO**: (A com antig A e anticopo anti B soro…..)
-gota de sangue, adicionar anticorpo anti A e B e verificar aglutinacao
-A tem anticorpos anti B mm nao tendo sido exposto devido a reacoes cruzadas (no ambiente ha moleculas mt parecidas com antigenios A e B logo ja montamos resposta)
INDIRETA
- Ig ou Ag nao sao bons, pe, antigenio so com um epitopo (nao permitindo formacao de rede)
- coloca- se numa particula de latex (pe) varios Ag tornando a particula multivalente p o epitopo
- permite detecao de antigenios soluveis quando adsorvidos na particula
- o oposto (anticorpos adsorvidos…) tmb se aplica
- utilizada, pe, pesquisa de fator reumatoide:
-fator é igM anti-IgG, biomarcador de doencas autoimunes
-qnt maior titulo, maior risco de artrite destrutiva
-igG (q se torna antigenio neste caso) é mau antigenio (poucos epitopos), mete se numa particula de latex
b) inibicao
- Ag-Ig reversivel, logo podemos formar rede e destrui la
- ex do teste de gravidez ( kit com beta HCG numa particula e anticorpos que fomam rede perfeita numa aglutinacao indireta, se gravida, hcg na urina logo demasiados antigenios q cobrem anticorpo, logo este nao se junta aos antigenios da placa e nao se forma rede
c) tecnicas de antiglobulina
- estudam, por reacoes de aglutinacao, casos onde o anticorpo forma complexos com antigenios mas nao consegue formar rede (sao fracamente aglutinantes)
- caso dos eritorcitos q se repelem e as igG sao incapazes de ligar duas cels (p formar rede juntar imunoglobulinas anti-globulina humana. anti Ig)
- teste direto ou de COOMBS direto
-usado quando in vivo ja se deu ligacao de igG do soro do indiv ao proprio globulo vermelho
-temos globulo vermelo com antigenios na superf, recoberto de anticorpos e adicionamos 2º anticorpo, reagente de coombs que forma ponte entre anticorpos primarios e forma rede
-utilizado p doencas hemoliticas recens nascidos, anemias hemoliticas autoimunes, detecao drogas superf de eritrocitos - teste indireto ou de COOMBS indireto
- detetar anticorpos incompletos no soro com eritorcitos e antigenios de um soro teste
- sangue doente c anticorpos, adiconamos eritrocitos p a ligacao e depois o reagente de COOMBS p rede de aglutinacao
(ou seja, direto usado p detetar anticorpos na superf de antigenios enquanto q o indireto é usado p anticorpos circulantes)
- o reagente de coombs é uma antiglobulina
c)´classificacao rh e doenca hemolitica do recem nascido
- rh+: antigenio D na superf dos eritrocitos
- (pg 15) mae rh- desenvolve anticorpos anti d depois do primeiro filho ser rh+ (pai era rh+) e no segundo filho se tmb for rh+, os anticorpos podem atacar e provocar doenca hemolitica do recem nascido
- recem nascido com anemica, p saber se e incompatibilidade Rh usar teste coombs direto (no recem temos os anticorpos da mae e temos os eritrocitos do filho com D na super logo so precisamos reagente coombs p formar rede (se formar, confirma doenca hemolitica por anticorpo materno)
PRECIPITAÇÃO
- elementos soluveis agregam se e formam precipitado insoluvel e visivel
- particulas + pequenas que na aglutinacao
- aglutinacao mais sensivel (particulas maiores com mais epitopos e possibilidade de formar mais ligacoes)
- precipitina: anticorpo capaz de interagir e precipitar antigenios
- precipitinogenio: antigenio soluvel capaz de interagir e precipitar antigenios em solucao
a) precipitacao passiva
- precipitacao em meio liquido
-liquido com anticorpo (baixo) e com antigenio (cima)
-migram em direcao ao outro
-atingem zona de equivalência
-formacao precipitado visivel - pode ser quantificado por técnicas como a turbidimetria e
nefelometria - imunodifusao - em gel
-difusao de molécula a testar numa substancia
-da se precipitacao nos locais onde se encontra porporcao equivalente
-depende de tamanho, temperatura, viscosidade, hidratacao, interacoes matriz e reagentes
-radial:
a) um componente fixado, outro difunde;
b) se for antigenio a migar, precipita quando chega zona de equivalencia (p dentro ha excesso de antigenio e p fora excesso de anticorpo);
c) qnt maior alvo de precipitacao, maior qnt de antigenio (pq foi necessario andar mais, diluir mais p haver zona de equivalencia. mm logica na titulacao)
d) tecnica quantitativa (determiba concentracao atraves curva padrao sendo quadrado do diametro proporcional a concentracao)
-dupla
a) ambos se difundem pela matriz ate encontrarem condicoes otimas de precipitacao (zona de equivalecia)
b) nao quantifica, usado p relacoes entre antigenios
c) identidade: antigenios com velocidades semelhantes e suas bandas de precipitina fundem em V; identidade parcial: fundem em V com “esporao”; nao identidade antigenios dif e bandas cruzam
b) com eletroforese (carga eletrica a separar moleculas)
- imunodifusao eletroforetica
-depende (alem doutras) massa e carga eletrica
-aplicado grandiente eletrico q separa proteinas de acordo com massa e carga
-utilizacao de anticorpos ou soro sobre o gel de eletroforese p identificar presenca de antigenios - imunofixacao eletroforetica
-pe, p medir classes de Ig existentens, utilizando anticorpos p cada uma, atraves da analise das curvas de cada coluna - imunoprecipitacao
