Práctica 12 Flashcards
(25 cards)
¿Qué es la fibrosis quística (FQ)?
Es una enfermedad autosómica recesiva que se caracteriza por la alteración de las células epiteliales en diferentes órganos
¿Dónde se presenta la mayor tasa de morbilidad y mortalidad?
Pulmón
Es el trastorno genético letal más común en las poblaciones de ascendencia del norte de Europa:
Fibrosis quística y se presenta en 1 de cada 2,500 nacimientos y 1 de cada 25 personas es portador heterocigoto
¿La fibrosis quística que la causa?
Diferentes mutaciones en el gen que codifica para la proteína Reguladora de la Conductancia Transmembranal de la FQ (CFTR)
¿Cómo funciona la proteína Reguladora de la Conductancia Transmembranal de FQ (CFTR)?
Funciona como un canal de cloro y controla la secreción de bicarbonato e inhibe el transporte de sodio
¿Cuáles son los componentes de la proteína Reguladora de la Conductancia Transmembranal de FQ (CFTR)?
2 regiones de 6 segmentos transmembranales, cada una conectada a un dominio de unión a nucleótidos (NBD1 y NBD2) que une ATP, así como un dominio regulador (R)
El canal se abre cuando el dominio R es fosforilado por:
La proteína Cinasa A (PKA) y el ATP se une a los NBD
¿Qué permite la homeostasis adecuada de la superficie de las vías respiratorias?
Transporte eficaz de la mucosidad que sale de las células caliciformes de la superficie de las vías respiratorias y las glándulas submucosas
¿Qué permite la regulación adecuada del bicarbonato y el pH?
Permite que se forme moco normal, lo que facilita la formación de un gel de dos capas que optimiza la limpieza mucociliar y la defensa de las vías respiratorias
¿Qué produce el agotamiento del líquido de la superficie de las vías respiratorias?
Se produce por la ausencia de secreción de líquido mediada por CFTR lo cual disminuye la profundidad del líquido de la superficie de las vías respiratorias, incluida la capa peri ciliar, lo que contribuye a la estasis del moco
¿A qué contribuye la disminución del transporte de bicarbonato?
PH ácido
¿Cuántas mutaciones se han descrito en CFTR?
Más de 2,000 y 400 son causantes de enfermedad
¿Cuál es la mutación más frecuente, presente en el 90% de los enfermos con FQ?
Deleción de los nucleótidos Citosina - Timina - Timina (CTT) del exón 11 denominada ∆ F508 que resulta en la pérdida del aminoácido Fenilalanina en la posición 508 de la proteína
La mutación ∆ |507 es mucho menos frecuente;
Es la pérdida de la isoleucina 507 por la deleción de un triplete Adenina - Timina - Citosina (ATC)
¿Qué es la mutagénesis dirigida?
Se refiere a una variedad amplia de técnicas que modifican la secuencia de ADN silvestre/original en regiones de longitud variable, deleciones o inserciones, pudiéndose tratar de cambios puntuales de un solo nucleótido
Se puede emplear un enfoque de PCR cambiando de una a tres bases en un segmento de ADN determinado:
Sintetizando primers para PCR que lleven estos cambios
La secuencia blanco puede ser amplificada aun cuando no haya 100% de complementariedad con la secuencia de los primers:
Disminuyendo la temperatura de hibridación/alineamiento para favorecer la hibridación del primer modificado. La modificación queda incorporada en la secuencia del amplificado
¿Qué permite el diagnóstico genético molecular?
Permite identificar una enfermedad por medio del estudio de cambios en el genoma de una persona
¿V o F?
Se puede emplear la mutagénesis dirigida con un enfoque de PCR para el diagnóstico de la mutación ∆ F508 de la FQ:
Verdadero
Se diseña un primer 5´ (Primer Fwd - Mut) que tenga:
Un cambio puntual (sustitución de C por G) cercano a la mutación ∆F508
¿Qué introduce el cambio puntual (sustitución de C por G) cercano a la mutación ∆F508?
Un sitio de corte especifico para la enzima de restricción Mbol (5´ - GATC - 3´) en el alelo sano, no así en el alelo mutante
¿Para que se diseña el primer 3´?
Para abarcar un sitio de corte constitutivo que sirve como control de la digestión
El alelo normal genera un producto de amplificación de:
262 pb mientras que el del alelo ∆F508 es de 259 pb
M:
S:
P1,P3,P4,P6:
P2:
P5, P7:
- marcador de peso molecular
- control sano
- pacientes homocigotos para ∆F508
- paciente sano
- paciente heterocigoto para ∆F508
