Protein Analysis

Question 1

Kendala analisis protein

Answer 1

Asam amino tak berkode
Peptida kecil
Asam nukleat
Fosfolipid
Gula amino
Porfirin
Vitamin alkaloid
Asam urat
Urea
Ion amonium

Question 2

Teknik berstandar Internasinal

Answer 2

Kjeldahl
Dumas
Spektroskopi inframerah
Biuret
Pengikatan pewarna anionik
Spektroskopi UV-VIS
Penganalisis asam amino

Question 2

Faktor yang perlu dipertimbangkan

Answer 2

Lipid & karbohidrat
Sensitivitas, akurasi, presisi, kecepatan, biaya analisis
Tujuan
Standar

Question 3

Pada biuret reaksi berada dibawah

Answer 3

Kondisi alkalin

Question 4

Reaksi biuret:

Answer 4

Cupric ions + ikatan peptida (min 2)&raquo_space; violet-purplish clor

Question 5

Warna biuret dibaca pada absorban

Answer 5

540 nm

Question 6

Kendala reaksi Biuret

Answer 6

Urea

Question 7

Reaksi Lowry lebih sensitif daripada

Answer 7

Reaksi Biuret

Question 8

Reaksi Lowry

Answer 8

Cu2+ + ikatan peptida + reduksi Folin-Ciocalteau phenol reagent + triptofan&raquo_space; bluish

Question 9

Warna reaksi Lowwry diawa pada absorban

Answer 9

650 nm

Question 10

Kendala reaksi Lowry

Answer 10

Phenolic compound

Question 11

Ninhydrin reaksi (1)

Answer 11

Asam amino + ninhydrin&raquo_space; Blue-violet (570 nm)

Question 12

Ninhydrin reaksi

Answer 12

Imino acids + ninhydrin&raquo_space; yellow (440 nm)

Question 13

Prinsip metode Kjeldahl

Answer 13

Menghitung Nitrogen koneten melalui 3 tahap

Question 14

3 step metode kjeldahl

Answer 14

Digestion
Destilation
TItration

Question 15

Reaksi digestion

Answer 15

Sample + H2SO4 + heat + katalis*&raquo_space; (NH4)2SO4 + CO2 + H2O

*HgO; selenium dioxide : copper sulfate = 3:1

Question 16

Reaksi (neutralization) + destilasi

Answer 16

(NH4)2SO4 + 2 NaOH&raquo_space; Na2SO4 + 2 H2O + 2 NH3

2 NH3 + 2 H3BO3  2 NH4H3BO3
indicators: methylene blue & methyl red (blue)

Question 17

Reaksi titrasi

Answer 17

2 NH4H3BO3 + 2 HCl&raquo_space; 2 NH4Cl + 2 H3BO3 (pink)

Question 18

Keuntungan metode kjeldahl

Answer 18

1. Berlaku untuk semua jenis makanan
2. Relatif murah (sistem manual)
3. Metode resmi untuk kandungan protein kasar

Question 19

Keterbatasan metode kjeldahl

Answer 19

-Sulit membedakan protein nitrogn dan nonprotein nitrogen
-Time consuming (dumas method 3 min)
-Presisi lebih buruk (spektrofotometri)
-Reagen korosif (dumas)

Question 20

Cara mengenali nitrogen protein dan nitrogen nonprotein pada sampel

Answer 20

Pengendapan oleh asam trikloroasetat (TCA)

Question 21

Step pada dumas method

Answer 21

Combustion
Reduction
GC
Detection

Question 22

Kekurangan metode dumas

Answer 22

Mahal
Protein kasar
Sampel berlemak tinggi»explosion

Question 23

Pengendapan protein oleh TCA

Answer 23

-Zat pengendap yang paling efisien untuk protein asli
-Reaksi asosiasi reversibel
-Lindungi konformasi asli protein
-Tanpa membelah protein
-Bentuk “seperti globula cair” yang stabil
-Menstabilkan untai β di ujung terminal N- dan C-

Question 24

Kelebihan metode spectroscopy uv-vis

Answer 24

1. Simple and rapid 2. No corrosive agent 3. Does not measure nonprotein N 4. More precise than Kjeldahl method

Question 25

Cereal, meat, soybean using

Answer 25

Biuret

Question 26

Wheat flour, soy products, meat, milk menggunakan metode

Answer 26

Dye-binding

Question 27

Milk, grains, cereal, meat, dairy product menggunakan metode

Answer 27

IR

Question 28

Keterbatasan metode spectroscopy

Answer 28

-Cukup mahal -Some methods are not common for food mixture (need precipitation and extraction) -Protein standar dan kalibrasi dibutuhkan -Beberapa senyawa mengganggu analisis

Question 29

Asam amino analyzer menentukan

Answer 29

Komposisi asam amino protein

Question 30

Prinsip dasar asam amino analyzer

Answer 30

1. Release amino acids by hydrolysis 2. Separation using chromatographic techniques 3. Quantification using amino acids standard

Question 31

Instrumen amino acid analyzer

Answer 31

-Ion-exchange chromatography (often) -Reversed-phase liquid chromatography -Gas-liquid chromatography

Question 32

Pada tahapan hidrolisis asam amino analisis prinsipnya adalah

Answer 32

Rebus dalam HCl 6N selama 24 jam

Question 33

Apa saja pertimbangan saat tahap hidrolisis asam amino analyzer

Answer 33

- Triptofan dihancurkan melalui hidrolisis asam - Metionin, sistein, treonin, serin bersifat progresif hancur selama hidrolisis - Asparagin dan glutamin diubah menjadi asam aspartik dan glutamat - Isoleusin dan valin dihidrolisis lebih lambat dibandingkan aa lainnya

Question 34

Valin dan isoleusin diperkirakan dari hidrolisat (berapa jam)

Answer 34

72 jam

Question 35

Sistein dan sistin diubah menjadi senyawa yang lebih stabil, yaitu asam sistein dengan cara

Answer 35

Hidrolisis dalam asam performat kemudian dihidrolisis dalam HCl 6N

Question 36

Triptofan dihidrolisis dalam larutan basa sebelum

Answer 36

Kromatografi atau menganalisis menggunakan metode lain

Question 37

Partisi dengan teknik kromatografi

Answer 37

* Pemisahan didasarkan pada kelarutan relatif sampel antara dua fase, bergerak dan stasioner * Fase normal: fase diam polar dan pelarut non polar * Fase terbalik: fase diam non polar dan polar pelarut

Question 38

Inon exchange chromatography

Answer 38

- Pertukaran anion >> permukaan inert berinteraksi dengan anion - “macet” >> menurunkan pH atau meningkatkan konsentrasi garam buffer

Question 39

Detektor asam amino

Answer 39

Asam Amino >> Metode ninhidrin >> Spektofotometer : * UV * Panjang gelombang tunggal (filter) * Panjang gelombang variabel (monokromatik) * Berbagai panjang gelombang (PDA) * Fluoresensi * Elektrokimia * Spektrometri massa

Question 40

Keuntungan metode asam amino analyzer

Answer 40

* Analisis asam amino baik kualitatif (komposisi) maupun kuantitatif * Dapat mengenali asam amino ganjil * Peptida dan asam amino tak berkode mungkin dapat dikenali * Teknik internasional * Cepat (sekitar 30 menit)

Question 41

Keterbatasan metode asam amio analyzer

Answer 41

* Mahal * Analis ahli, diperlukan pengetahuan dasar tentang kromatografi