Replicazione DNA 🧬 Flashcards
(35 cards)
Quando Watson e Crick pubblicarono la struttura del DNA?
1953
Quali scienziati proposero la troia semiconservativa della replicazione?
Meselson e Sthal nel 1958
Descrivi l’esperimento che ha portato alla scoperta della teoria semiconservativa della replicazione del DNA
E coli cresciuti in terreno con azoto 15 vengono spostati in azoto 14. Dopo 20 minuti vengono lisi e ultracentrifugati. Il loro gradiente di densità è a metà tra l’azoto 15 e 14
Cosa fa la DNA pol?
Polimerizza mettendo insieme più nucleotidi per formare DNA
Dimmi le polimerasi della cellula procariote
DNA pol 1 -> partecipa in un secondo momento alla replicazione
DNA pol 3 -> principale enzima della replicazione
DNA pol 2 -> non partecipa alla replicazione, interviene per riparare il DNA
Dimmi le polimerasi della cellula eucariotica
DNA pol delta -> principale nei meccanismi di replicazioni
DNA pol alfa-> analoga alla polimerasi 1 procariotica -> rimuovono primers
DNA pol epsilon -> non chiaro cosa fa ma si pensa lavori con la delta
DNA pol beta-> uguale alla polimerasi 2, ripara il DNA
Dimmi come agisce la DNA polimerasi
La DNA pol sintetizza in direzione 5’ -> 3’ usando nucleotidi 3 fosfato come substrato. La prima cosa che fa è staccare un pirofosfato (2 fosfati attaccati) dal nucleotide ottenendo energia. Ottiene poi altra energia rompendo in due il pirofosfato per altra energia. Infine usa l’ultimo fosfato del nucleotide per formare un legame fosfodiesterico con l’OH libero del nucleotide che precede
La DNA pol può creare un filameno da 0?
No, può solo estendere filamenti presistentisfruttando l’OH in 3’ libero
Parlami delle elicasi
Hanno il compito di aprire la doppia elica di DNA in modo bidirezionale partendo da un sito d’inizio. Rompe i legami a idrogeno tra le catene utilizzando ATP.
Cosa sono le SSB, “proteine leganti il singolo filamento”?
Proteine che si legano ai filamenti di DNA aperti evitando che si riassocino dopo l’apertura della bolla di replicazione.
Quali proteine evitano la super-spiralizzazione del DNA?
Le topoisomerasi
Dimmi come agisce la Topoisomerasi I
Agisce sulle super-spiralizzazioni moderate. Taglia solo un filamento della doppia elica per rilassare il filamento e poi lo riattacca
Dimmi come agisce la Topoisomerasi II
Agisce su super-spiralizzazioni più intense. Taglia entrambi i filamenti di DNA per farli rilassare e poi li riattacca. Viene usata molto quando il DNA è particolarmente compattato
Da quale punto del DNA comincia la replicazione?
Dall’oriC (unico per i procarioti in quanto hanno un DNA circolare)
Dimmi com’è strutturato l’oriC ddei procarioti
È una sequenza di 245 paia di bas8 con 2 tipi di sequenze:
- 3 sequenze da 13 nucleotidi con ATATAT
- 4 sequenze di appoggio per la proteina DNaA che attrae l’elicasi facendola appoggiare alle 3 sequenze di 13 nucleotidi
Chi fu il primo a scoprire l’esistenza della bolla di repliczzione e della forcella di replicazione?
Il ricercatore Cairns nel 1962
Dimmi come Cairns ha scoperto l’esistenza delle forcelle di replicazione
Utilizzò l’E. Coli marcando il DNA con Timidina Triziata che sostituisce la Timina permettendo la visualizzazione del DNA tramite autoradiografia.
Qual è il compito della RNA primasi
Produce il primer, una sequenza di 10-15 ribonucleotidi che fanno da continuazione per la DNA polimerasi
Qual è il compito della DNApol 1?
Dopo che la DNApol 3 ha sintetizzato il DNA ibrido, la DNApol 2 va a rimuovere i frammeti di okazaki dal filamento lento e va a sostituire i vuoti simtetizzando il DNA corrispondente
Quante DNA pol ci sono durante la replicazioni?
C’è una sola DNA pol per ogni tipo che lavora per entrambi i filamenti
Dimmi gli step e gli enzimi coinvolti nella rimozione dei primer
- Enzima che forma primer: RNA primasi
- DNA pol 1 rimuove i primer (frammeti di okazaki) -> rimangono liberi OH in 3’ di un nucleotide e fosfato in 5’ di un altro nucleotide
- DNA ligasi attacca OH e fosfato formando legame fosfodiesterico
Come fa la DNA pol a far sembrare che la sua azione sia nella stessa direzione per entrambi i filamenti?
Capovolge il filamento lento andando sempre in 5’ -> 3’
Dimmi tre differenze tra la replicazione del DNA nei procarioti e quella negli eucarioti
- la presenza di più origini di replicazione (ori) sempre bidirezionali
- differneze nell’azione degli enzimi
- la rimozione dei primer viene mediata da Fen-di e RNasi H negli eucarioti mentre nei procarioti è mediata da DNApol 1
Dimmi come avviene l’inizio della replicazione nella cellula eucariote
- La RNA primasi è associata alla DNApol alfa.
- La RNA primasi costituisce il primer e la DNApol alfa dopo che il primer è stato formato lo estende di qualche deossinucleotide e costituisce già un piccolo DNA primario.
- Arriva poi il complesso RF-C che usa 1 ATP per circolarizzare PCNA che si attacca al piccolo DNA attraendo la DNA pol delta
