T5 - Obtención y producción de anticuerpos

Question 1

Los antígenos reconocidos por los anticuerpos son proteínas.

Answer 1

F

Los Ac se pueden unir a muchos lugares, a pesar de que tenemos la idea preconcebida que que necesariamente van a reconocer una proteína.

Question 2

Cuando hablamos de anticuerpos…

¿cuál es la función de la cadena J?

Answer 2

Es una pequeña cadena polipeptídica que hace de nexo de unión entre monómeros de IgA (para formar dímeros) y de IgM (para formar pentámeros)

Question 3

Las Ig son glucoproteínas formadas por una cadena ligera y otra pesada que se unen entre si mediante puentes disulfuro.

Answer 3

F

Son dos cadenas dobles: dos ligeras y dos pesadas

Question 4

Los carbohidratos de los anticuerpos se encuentran principalmente en la región constante

Answer 4

V

Question 5

Tanto las cadenas pesadas como las cadenas ligeras presentan un extremo N-terminal variable y un extremo C-terminal constante.

Answer 5

V

Question 6

El anticuerpo se une al antígeno a través de su región variable, mediante fuerzas fuertes.

Answer 6

F

La unión Ac-AG NO SON FUERZAS FUERTES si no muchas FUERZAS DÉBILES (la unión hace la fuerza)

Question 7

En las interacciones antígeno-anticuerpo…

Cuanto mayor sea el número de interacciones y más óptima sea la distancia… mayor será la especificidad.

Answer 7

V

Question 8

La unión antígeno-anticuerpo es una union fuerte

Answer 8

V

(son muchas débiles que dan una fuerte)

Question 9

La obtención de anticuerpos tradicional se basa en inyectar un antígeno a un animal, esperar la reacción inmunológica y extraer el plasma, para obtener los anticuerpos contra distintos epítopos.

Answer 9

F

SUERO

Question 10

Las células plasmáticas son linfocitos maduros que exponen los anticuerpos en su superfície

Answer 10

F

No los conservan en su membrana si no que los secretan.

Question 11

La unión de los anticuerpos a los antígenos es la señal para que el linfocito B comience a proliferar y se diferencie en las células plasmáticas.

Answer 11

V

Question 12

Un inmunógeno es una proteína que induce una respuesta inmune

Answer 12

F

No necesariamente e suna proteína: “sustancia capaz de inducir una respuesta inmune”.

Question 13

Un inmunógeno puede estumular a más de un clon de linfocito B

Answer 13

V

Question 14

Cada región única de la molécula del antígeno capaz de unir un anticuerpo complementario se denomina epítopo o determinante antigénico.

Answer 14

V

Question 15

Define “anticuerpos policlonales”

Answer 15

Diferentes anticuerpos, producidos por diferentes clones de linfocitos B, que son específicos para distintos epítopos de un mismo antígeno.

Question 16

El término inmunógeno designa a cualquier compuesto capaz de reaccionar con un anticuerpo, sin que necesariamente sea capaz de inducir la formación de anticuerpos.

Answer 16

F

Es la deffinición de antígeno

Question 17

El término inmunógeno se utiliza para hacer referencia a los compuestos capaces de inducir la formación de anticuerpos cuando son inyectados en el hospedador

Answer 17

V

Question 18

¿Cuál es la diferencia entre antígeno e inmunógeno?

Answer 18

Ambos son moléculas reconocidas por anticuerpos, la diferencia radica en que el inmunógeno, al hacerlo, desencadena una respuesta inmune, mientras que esto no necesariamente ocurre en el caso de los antígenos (pueden ser reconocidos por el anticuerpo sin desencadenar respuesta inmune).

Question 19

La morfina es un antígeno, lo que implica que en ningún caso va a ser un inmunógeno.

Answer 19

FALSO, la morfina libre nunca será inmunógeno, pero puede serlo si se une a un carrier (i.e. si se conjuga a una proteína).

Question 20

El carrier es una proteína que es reconocida por el sistema inmune, de modo que al conjugarlo con un hapteno conseguimos que el hapteno desencadene una respuesta inmune.

Answer 20

F

El carrier por si mismo no ha de ser reconocido por el sistema inmune, lo que debe ser reconocido es el complejo hapteno-carrier

Question 21

El dogma de Paracelso aplica a la inmunogeneicidad que genera un compuesto

Answer 21

V
Cuanto más concentrado esté el compuesto (mayor dosis), mayor/mejor será la respuesta (en este caso, respuesta inmune).

Ahí os he visto mis reinas de Toxicología :)

Question 22

¿Qué factores determinan la inmunogeneicidad?

Answer 22

• Ser reconocido como extraño (reconocido por el SI, desencadenando una respuesta inmune)
• El peso molecular (+ peso = mejor inmunógeno)
• Complejidad química (+ complejidad = mejor inmunógeno)
• La concentración (+ [ ] = mejor inmunógeno)

Question 23

A la hora de obtener anticuerpos…

Por qué se debe tener en cuenta la distancia evolutiva entre la especie de la que procede el anticuerpo de interés y la especie que queremos usar para obtener los anticuerpos?

Answer 23

Hay proteínas muy conservadas en la evolución, como las globinas, la actina, la tubulina, etc. Por lo que es complicado que produzcan una respuesta inmune significativa cuando se inyectan a un animal para obtener anticuerpos. Por esto, cuanta más distancia evolutiva haya entre ambos organismos, mejor será la respuesta inmune.

Question 24

Entre 1000 y 6000 Da es el rango de pesos moleculares óptimo para que una molécularesulte inmunogénica

Answer 24

F

• Un elevado peso molecular (superior a 6kDa = aprox 60 aa) es lo mejor –> cuanto más grande sea mejor inmunógeno.
• Generalmente, las moléculas menores de 1.000 Daltons (unos 10 aminoácidos) son malos inmunógenos y, por tanto, a veces es necesario conjugarlas con otras moléculas.
• Entre 1.000 y 6.000 Daltons, depende de otras características, como la concentración, la complejidad, etc.

Question 25

La digoxigenina es un carrier muy común

Answer 25

F ## Footnote Es un hapteno.

Question 26

Para conseguir que un hapteno desencaden una respuesta inmune se une por interacciones electrostáticas a una proteína que actúa como carrier

Answer 26

F ## Footnote Enlace covalente entre un grupo carboxilo del hapteno y un grupo amino del carrier

Question 27

Para obtener una buena respuesta inmune conviene unir varias moléculas de hapteno (no una sola) al carrier.

Answer 27

V

Question 28

Un epítopo es un fragmento de secuencia aminoacídica de la proteína que es reconocido por el anticuerpo.

Answer 28

F ## Footnote Ese sería el caso de un epítopo contínuo. Pero también existen epítopos discontinuos, que corresponden a aminoácidos alejados en la secuencia primaria, pero que están juntos cuando en la proteína plegada. Además, no necesariamente son aminoácidos (recuerda que hay antígenos no proteicos).

Question 29

Las técnicas que usan anticuerpos se ven limitadas por el hecho de que no pueden incluir una desnaturalización de la proteína, ya que, en tal caso, los epítopos dejan de ser reconocidos por los anticuerpos.

Answer 29

F ## Footnote Si bien se ha de tener en cuenta que, al desnaturalizar la proteína los epítopos disconntinuos desaoarecen, los contínuos siguen pudiendo ser reconocidos.

Question 30

El número de epítopos de un antígeno es directamente proporcional al tamaño de este.

Answer 30

F ## Footnote El nº de epítopos no es directamente proporcional al tamaño, porque es algo que depende de la estructura y sus características.

Question 31

¿Cuáles son las 3 características de un epítopo?

Answer 31

- Complejidad química - Hidrofilicidad - Accesibilidad ya que si la proteína esta plegada de una determinada manera, los aminoácidos internos no suelen funcionar como inmunógenos. Generalmente, los aminoácidos que participan están en la superficie, que se corresponden, generalmente, con la zona más hidrofílica.

Question 32

Para la obtención de anticuerpos se debe purificar el antígeno con su estructura nativa

Answer 32

F ## Footnote Se puede utilizar la proteína nativa directamente, pera también desnaturalizada (se utiliza cuando es difícil de purificar).

Question 33

La estructura exacta del epítopo de interés también se pueden emplear péptidos sintéticos de entre 10 y 20 aminoácidos

Answer 33

V

Question 34

El adyuvante de Freund completo es una mezcla de aceite mineral y detergente (emulsionante) en proporción 2:1 con agua

Answer 34

F ## Footnote Adyuvante INcompleto

Question 35

El adyuvante de Freund completo (CAF) es una mezcla de aceite mineral y detergente en proporción 2:1 con agua, con microbacterias muertas para estimular el sistema inmunitario (pero no te genera la enfermedad)

Answer 35

V

Question 36

El adyuvante de Freund completo (CAF) es una mezcla de aceite mineral y detergente en proporción 1:2 con agua, con microbacterias muertas para estimular el sistema inmunitario (pero no te genera la enfermedad)

Answer 36

F ## Footnote Proporción 2:1

Question 37

Los liposomas pueden usarse como adyuvantes que van liberando poco a poco el antígeno al sistema inmune de modo que no se produzca un choque anafiláctico.

Answer 37

V

Question 38

Si el antígeno de interés es poco inmunológico, se inyecta preferentemente por vía subcutánea

Answer 38

F ## Footnote Intraesplénicas (en el bazo), en las almohadillas de las patas, ganglios linfáticos y la conjuntiva del ojo.

Question 39

A la hora de obtener anticuerpos, se recomienda inyectar el antígeno al menos a 2 animales, ya que puede haber diferencias importantes entre animales.

Answer 39

V

Question 40

Para la obtención de anticuerpos policlonales, se deben administrar 4 inyecciones en total al animal.

Answer 40

F ## Footnote La 3ª (dosis de refuerzo) es opcional

Question 41

En la producción de anticuerpos policlonales, estos se pueden recoger unos días después de haber administrado la 2ª dosis o bien esperar hasta administrar una 4ª y recogerlos después.

Answer 41

V

Question 42

La inmunización inicial se realiza con CAF (Adyuvante de Freund Completo), mientras que la segunda se hace con IAF (Adyuvante de Freund Incompleto).

Answer 42

V

Question 43

La inmunización inicial se realiza con IAF (Adyuvante de Freund Incompleto), mientras que la segunda se hace con CAF (Adyuvante de Freund Completo).

Answer 43

F ## Footnote La inmunización inicial se realiza con CAF (Adyuvante de Freund Completo), mientras que la segunda se hace con IAF (Adyuvante de Freund Incompleto).

Question 44

El antisuero es un suero con una mezcla de anticuerpos monoclonales frente a distintos epítopos del inmunógeno, llamado antisuero.

Answer 44

F ## Footnote Policlonales

Question 45

# En la obtención de anticuerpos policlonales... ¿Para qué realizamos una extracción de suero antes de proceder a la inmunización del animal?

Answer 45

Antes de nada se realiza una extracción de suero (2-5 mL) para comprobar que no hay anticuerpos (suero preinmune) → si ha sufrido esa enfermedad previamente no te va a dar la respuesta que quieres.

Question 46

# Tras recoger los anticuerpos policlonales generados en el animal... Se puede realizar un ELISA indirecto para conocer la especificidad de los anticuerpos generados.

Answer 46

F ## Footnote El ELISA indirecto proporciona la concentración de anticuerpos, que es proporcional a la calidad del suero, peor no es indicativa de la especificidad.

Question 47

# Tras recoger los anticuerpos policlonales generados en el animal... Se puede realizar un inmunobloting o una inmunoprecipitación a fin de comprobar la especificidad de los anticuerpos generados.

Answer 47

V ## Footnote Se utilizan los anticuerpos con un pool de proteínas para ver su especificidad. Si hay muchas bandas, es que no es muy específico, por lo que no debería emplearse para un ELISA, una inmunohistoquímica, u otros métodos en que no haya fraccionamiento de la muestra, porque estaríamos reconociendo más proteínas que las diana.

Question 48

¿Qué es una proteína A o G?

Answer 48

La proteína A/G es una proteína modificada genéticamente, que se une a todas las subclases de IgG. Adicionalmente, se une a IgA, IgE, IgM y a menor medida a IgD. También se une bien a todas las subclases de IgG de ratón, pero no se une a las IgA, IgM o albúmina sérica de ratón. Por eso se usan en lechos adsorción para purificar fracciones enteras de inmunoglobulinas.

Question 49

Las proteínas A o G permiten aislar las IgG de una muestra

Answer 49

F ## Footnote Se unen a todas las subclases de IgG, pero también a IgAs, IgMs, IgEs y, aunque en menor medida, a IgDs.

Question 50

Para purificar una fracción entera de inmunoglobulinas se puede emplear una cromatografía de intercambio iónico de DEAE-celulosa como primera separación y después realizar una precipitación de sulfato amónico, precipitando las proteínas para quitarles el agua de solvatación.

Answer 50

V

Question 51

Lo bueno del PSA es que cada família de proteínas tiene una concentración concreta de sulfato amónico que las precipita, en el caso de las inmunoglobulinas es el 40%.

Answer 51

V

Question 52

Para la obtención de anticuerpos policlonales, una vez inmunizado el animal, se recogen linfocitos (del bazo o de los nódulos linfáticos) y se fusionan con células procedentes de un mieloma de ratón (línea inmortal).

Answer 52

F ## Footnote Es par aobtener MONOclonales.

Question 53

Para obtener anticuerpos monoclonales se generan hibridomas, que se seleccionan mediante medio HAT.

Answer 53

V

Question 54

¿Cómo puedes seleccionar los hibridomas según el anticuerpo que producen?

Answer 54

Existe una amplia variedad de tests, como el radioinmunoensayo o inmunoensayos enzimáticos

Question 55

# En el contexto de la obtención de anticuerpos monoclonales... La expansión clonal, consiste en aislar hibridomas (diluyendo para sembrar 1 solo por pocillo) y consiguiendo que este prolifere, una vez comprobado que produce anticuerpos.

Answer 55

V

Question 56

La forma más recomendada de realizar una expansión clonal es in vivo.

Answer 56

F ## Footnote In vitro

Question 57

La expansión clonal in vivo consiste en inyectar los hibridomas en la cavidad intraperitoneal de forma que proliferan generan do una especie de tumor que libera los anticuerpos al líquido de la cavidad.

Answer 57

V

Question 58

La realización de una genoteca para la obtención de anticuerpos monoclonales es una buena estrategia para suprimir la experimentación animal.

Answer 58

F ## Footnote Aunque permite reducir el uso de animales, la genoteca se genera administrando un antígeno a un animal, para realizarle la esplectomía que permite obtener los ARNm a partir de los que obtener el ADN..

Question 59

Si se recurre a una genoteca para la producción de anticuerpos monoclonales, estos se acaban recogiendo del medio de cultivo al que los secreta E.coli

Answer 59

F ## Footnote E.coli no secreta los anticuerpos, los presenta en su membrana: es necesario lisar las células y degradar sus membranas para quedarse con el anticuerpo.