Tinciones Y Macrocopia Flashcards
Pasos de preparación de tejido
- Fijación con formol.Detiene el metabolismo celular. Impide la degradación. Destruye microorganismos patógenos. Endurece el tejido.
- Inclusión en parafina
- Lavado
- Deshidratación con alcoholes. Se elimina el agua.
- Aclarado: solventes orgánicos (xileno o tolueno)
- Montaje de portaobjetos (albumina=adherencia)
- Tinción: Se elimina la parafina/xileno o tolueno para hacerla.
- Rehidratación (disminuye la concentración de alcohol).
- Hematoxilina en agua
- Deshidratación = soluciones crecientes de alcohol
- Eosina (es más soluble en alcohol)
- Xileno o tolueno y se realiza el montaje al portaobjetos y se coloca el cubreobjetos.
Tincion hemotixilina
Colorante azul. Se une a los sitios basofilos (afinidad por las cargas negativas). Reaccionan con componenctes anionicos de las células y los tejidos (carga negativa=grupos fosfato del ácido nucleico, grupos carboxilo de las proteínas).
Tincion eosina
Colorante rosa. Se une a los componentes ácidofilos(carga positiva). Reaccionan con grupos catiónicos de las células y tejidos. Con los grupos aminoácidos ionizados de las proteínas.
Conservación de células adiposas
- Hacer el corte de congelación
- Utilizar colorantes para que se disuelvan en grasas
- Fijación de la membrana.
- Los solventes orgánicos afectan a los lípidos
Sustancias con basofilia
- Heterocromatina y núcleolo
- Componentes de Citoplasma
- Materia extracelular
Sustancias ácidofilas
- Fibras extracelular
- Filamentos citoplasmáticos
Histoquímica enzimatica
- Permite identificar enzimas.
- Detectan el producto de la reacción de la actividad enzimática.
- Utilizando un reactivo captura (colorante o metal pesado).
Inmunocitoquimica
- Especialidad de reacción antígeno anticuerpo.
- Los anticuerpos son purificados y conjugados con un colorante fluorescente (flúor o cromo).
- Los fundamentos absorben la luz a una longitud de onda diferente (UV) y emiten una luz visible específica (verde, rojo o amarillo).
- Cortes de tejidos por congelación o por fijación.
- Se examina con microscopio de fluorescencia o microscopio confocal.
Policlonales
Se introduce un anticuerpo de un animal a otro, el otro animal genera una reacción (1) inmunológica en la que produce anticuerpos específicos para ese cuerpo externo, se extraen (2) y se hace una clona.
Monoclonales
Se hace hace una sintetizado en el laboratorio. (1)
Hibridación
- Permite localizar mRNA y DNA mediante hibridación de secuencia específica utilizando una sonda con la secuencia complementaria, la cual es marcada con isotopos radioactivos para su detección.
- Puede llevarse a acabo en una solución o una membrana de nitrocelulosa.
- Dentro de células o tejidos como células de cultivo o embriones.
- Técnica de hibridación in situ con fluorescencia (FISH). Puede haber hibridación con marcadores radioactivos.
Microscopio óptico
Permite observar imágenes dimensionales.
Microscopio electrónico (transmisión y barrido)
- Microscopio electrónico de transmisión
- Rayo de luz de electrones que permite la imagen dimensional
- Microscopio electrónico de barrido
- Imagen de 3 dimensiones, debido a un rayo de electrones que pasan sobre la muestra y barre o explora la superficie.
Microscopio de fuerza atómica
No es óptico, tiene una sonda puntiaguda muy fina que explora sobre la superficie de la muestra biológica. Aquí la muestra no tiene que estar en el vacío, puede estar en agua, es posible obtener imágenes de células vivas y su médico circundante.
