Uitdagingen | Inhibitie & Low level DNA

Question 1

Wat zijn 3 soorten PCR inhibitie?

Answer 1

• remmen cellyse
• interfereren met DNA
• remmen polymerase

Question 2

Hoe kun je de remmende stoffen bij PCR inhibitie verhelpen?

Answer 2

Remmende stoffen: uit sample halen vóór analsye, of de werking tegengaan.

Question 3

Wat kun je doen om PCR inhibitie tegen te gaan?

Answer 3

• MiniSTR –> kleinere producten
• Verdunnen DNA template –> minder remmers
• Meer polymerase –> blijft meer over
• Verschillende soorten polymerase.–> Hottub/Ultma

Question 4

Wat voor stoffen kun je toevoegen om PCR inhibitie tegen te gaan?

Answer 4

BSA, bindt aan remmers
Betaine, denaturatie DNA strengen
NaOH, neutraliseert remmers
Aluminium ammonium sulfaat, bindt humus bestanddelen

Question 5

Wat kun je doen als je na qPCR een lage concentratie DNA krijgt?

Answer 5

Zuiveren en nogmaals qPCR
anders PCR aanpassen

Question 6

Wat kun je doen om low level DNA te verhelpen?

Answer 6

• aantal cycli verhogen
• injectiehoeveelheid verhogen
• Zuivering PCR product
• Volume van samples omlaag
• nested PCR
• PCR parameters veranderen
• mtDNA testen

Question 7

Wat is het nadeel van PCR cycli verhogen? (2)

Answer 7

Kans op teveel DNA
Contaminatie

Question 8

Wat is het doel van verhogen injectievolume?

Answer 8

Meer product voor detectie
scherpere en hogere pieken

Question 9

Wat gebeurt er bij nested PCR?

Answer 9

PCR herhalen met andere primers, wel hetzelfde target

Question 10

Hoe kun je PCR kits veranderen?

Answer 10

• betere buffers
• meer polymerase
• miniSTRs